环境的快速调整这对细胞的生命活动来说是 upon the lipids in their microenvironment not 非常重要的 only for scaffolding, but for enzymatic activity he Nat-K+ ATPase is one example. Please 3.紧密连接除了连接细胞外还有什么作用? design an experiment to test the influence of 意义何在? 答:紧密连接除了连接细胞之外,还有两个作 nembrane fluidity on the velocity of the Na+-K+ 用:防止物质双向渗漏,并限制了膜蛋白在脂 分子层的流动,维持细胞的极性。 Answers 1. Identify a tissue that would serve as a good 4.胰高血糖素和肾上腺素是如何使靶细胞 source of the enzyme of interest, e.g., the plasma 的cAMP的浓度升高的? membranes of nerve tissue. solubilize the 答:胰高血糖素和肾上腺素作为第一信使作用 Na+-K+ ATPase from its native membrane using 于靶细胞的膜受体,通过G蛋白偶联细漖活腺 detergents. Reconstitute the enzyme into 苷酸环化酶将ATP生成CAMP liposomes of simple and well-defined 5.核酶是如何被发现及证实的?这一发现有 omposition, then assay the enzyme for activity 什么意义? By 答:1981年, Thomas Cech和他的同事在研 different amounts of saturated and unsaturated 究四膜虫的26SRNA前体加工去除基因内含 fatty acids, the fluidity of the liposome can be 子时获得一个惊奇的发现:内含子的切除反 altered, and the enzyme can be tested under 应发生在仅含有核苷酸和纯化的265TRNA前 conditions of different fluidity.( To measure the 体而不含有任何蛋白质催化剂的溶液中可能 的解释只能是:内含子切除是由26 SrRNA前 fluidity of the liposomes directly, without having 体自身催化的而不是蛋白质 to infer it from the fatty acid composition, either FRAPor SPT techniques can be applied 6.为什么说水是细胞中优良的热缓冲体系? 答:使克水的温度上升摄氏度所需要的能2.如何证明M聚合酶Ⅲ进行6 S rRNA基因 量是1卡,这与其它液体相比是很高的,水吸转录时,使用的是内部启动子? 收的大部分能量被用来破坏分子间氢键,这些 可通过基因操作。如将5 SrrNA基因的5 氢键是由于水分子的极性和不对称性造成的。侧的上游序列完全除去,检测转录情况,然后 因为吸收的能量要被用于断裂弱键,水的温度再切去5 S rRNA基因的部分内部序列,再检测 不象其它液体那样容易升高。在此种意义上 转录情况。实验结果表明:将5 S rRNA基因的 环境温度的变化可以在细胞中被缓冲 5′侧的上游序列完全除去并不影响5 S rrNA 基因的转录。但是,如果将5 S rrNA基因内部 五、实验证明题。(简要说明,不需详细步骤。缺失一部分序列(从50位到80位缺失),RNA 每小题5分任选2题, 聚合酶Ⅲ不仅不能转录这段DNA,甚至不能结 共10分)。 合上去(图6E-1)。如果将5 SrRNA基因的内部 启动子序列插入到基因组的其它部位,会使插 Some integral membrane enzymes depend 入的部位形成一个新的转录起点6 环境的快速调整, 这对细胞的生命活动来说是 非常重要的。 3. 紧密连接除了连接细胞外还有什么作用? 意义何在? 答: 紧密连接除了连接细胞之外，还有两个作 用：防止物质双向渗漏，并限制了膜蛋白在脂 分子层的流动，维持细胞的极性。 4. 胰高血糖素和肾上腺素是如何使靶细胞中 的 cAMP 的浓度升高的? 答: 胰高血糖素和肾上腺素作为第一信使作用 于靶细胞的膜受体, 通过 G 蛋白偶联细激活腺 苷酸环化酶,将 ATP 生成 cAMP。 5. 核酶是如何被发现及证实的? 这一发现有 什么意义? 答: 1981 年，Thomas Cech 和他的同事在研 究四膜虫的26S rRNA前体加工去除基因内含 子时获得一个惊奇的发现∶内含子的切除反 应发生在仅含有核苷酸和纯化的26S rRNA前 体而不含有任何蛋白质催化剂的溶液中,可能 的解释只能是:内含子切除是由 26S rRNA 前 体自身催化的,而不是蛋白质。 6. 为什么说水是细胞中优良的热缓冲体系？ 答：使一克水的温度上升一摄氏度所需要的能 量是 1 卡。这与其它液体相比是很高的。水吸 收的大部分能量被用来破坏分子间氢键，这些 氢键是由于水分子的极性和不对称性造成的。 因为吸收的能量要被用于断裂弱键，水的温度 不象其它液体那样容易升高。在此种意义上， 环境温度的变化可以在细胞中被缓冲。 五、实验证明题。(简要说明，不需详细步骤。 每小题 5 分,任选 2 题， 共 10 分)。 1. Some integral membrane enzymes depend upon the lipids in their microenvironment not only for scaffolding, but for enzymatic activity. The Na+-K+ ATPase is one example. Please design an experiment to test the influence of membrane fluidity on the velocity of the Na+-K+ ATPase. Answers: 1. Identify a tissue that would serve as a good source of the enzyme of interest, e.g., the plasma membranes of nerve tissue. Solubilize the Na+-K+ ATPase from its native membrane using detergents. Reconstitute the enzyme into liposomes of simple and well-defined composition, then assay the enzyme for activity. By synthesizing a variety of liposomes with different amounts of saturated and unsaturated fatty acids, the fiuidity of the liposome can be altered, and the enzyme can be tested under conditions of different fiuidity. (To measure the fiuidity of the liposomes directly, without having to infer it from the fatty acid composition, either FRAP or SPT techniques can be applied.) 2. 如何证明 RNA 聚合酶Ⅲ进行 5S rRNA 基因 转录时, 使用的是内部启动子? 可通过基因操作。如将 5S rRNA 基因的 5＇ 侧的上游序列完全除去，检测转录情况, 然后 再切去 5S rRNA 基因的部分内部序列,再检测 转录情况。实验结果表明: 将 5S rRNA 基因的 5＇侧的上游序列完全除去并不影响 5S rRNA 基因的转录。但是，如果将 5S rRNA 基因内部 缺失一部分序列(从 50 位到 80 位缺失)，RNA 聚合酶Ⅲ不仅不能转录这段 DNA，甚至不能结 合上去(图 6E-1)。如果将 5S rRNA 基因的内部 启动子序列插入到基因组的其它部位，会使插 入的部位形成一个新的转录起点