者按如下反应生成5CIP: 5’-UTP+NH3+AIP 5’CTP+ADP+Pi 在嘧啶核苷酸的生物合成途径中,主要的调节酶是天冬氨酸转氨基甲酰酶。它是一个变 构酶,受到CTP的强烈反馈抑制,UMP、UDP及UTP也对该酶具有抑制作用,ATP则对 它有激活作用,因此ATP的存在对CTP的抑制具有拮抗作用。 Co2h ATP ADP 天冬氨酸Pi NH CH2 HoN-COOPO 氮基甲醱瞵氨基甲酰磺酸天冬氨酸转 酸合成酶 基甲 反馈抑制 A氮基甲酰天冬氨酸 二氢乳消酸 氢乳 ○ATP激活 酸脱氢醇 ADP ATP ADP ATPCO 已乳消酸6酸核OH UTP 谷氨酰胺 核苷二6核苷单婿孔核甘CoCH 苷酸酸激 谷氨酸台成 PRPP H203F0H2 2 乳消酸 HH/、核糖5 乳氢核苷-5-6酸 RP-0-P-0-P 胞苷三磷酸 图822嘧啶核苷酸的生物合成途径及调节 83核苷酸类物质生产菌的分离和选育 83.1核苷酸类物质生产菌的分离 从野生菌中直接筛选核苷及核苷酸生产菌的方法主要有生长圈法和特殊平板培养法 83.1.1生长圈法 用生长圈法筛选核苷酸产生菌的机理是利用核苷酸产生菌能够促进嘌呤营养缺陷型大 肠杄菌生长,因而能形成较大的生长圈。具体方法是将非精确的嘌呤营养缺陷型大肠杆菌(如 E. Coli p64或B94)与不含嘌呤的琼脂混合后倒成平板,在平板表面涂布受检的细菌,在- 定条件下培养。如果被检菌能够产生嘌呤类产物,在其周围形成生长圈,然后挑选生长圈较 大的菌落进行进一步的鉴定后作为诱变育种的出发菌株 也可以将被检菌株先在平板上培养,出现菌落时用紫外线照射杀菌。再用鸟嘌呤营养缺 陷型的枯草杄菌的固体培养基覆盖于平板上,经过一定温度下的保温培养,如果发现能够生 长的突变株,就说明它能够产生核苷类物质 8312特殊平板培养法 采用含有高浓度的磷酸盐、镁盐、葡萄糖和锰盐的琼脂平板培养基也能用于筛选产核苷 酸类物质的微生物,具体的筛选步骤如下: 1)采集哺乳动物、鸟类的粪和土壤样品。 2)分离培养基的成分为(%):葡萄糖10,琼脂20,KHPO41.0,MgSO47H2O10,CaCl2H2O 0.01,FeSO47H2O0.001,MnSO4H2O0.0001生物素30μg/L,泛酸钙10mg/L,硫胺素盐3 者按如下反应生成 5’-CTP： 5’-UTP + NH3 + ATP 5’-CTP + ADP + Pi 在嘧啶核苷酸的生物合成途径中，主要的调节酶是天冬氨酸转氨基甲酰酶。它是一个变 构酶，受到 CTP 的强烈反馈抑制，UMP、UDP 及 UTP 也对该酶具有抑制作用，ATP 则对 它有激活作用，因此 ATP 的存在对 CTP 的抑制具有拮抗作用。 图 8.2.2 嘧啶核苷酸的生物合成途径及调节 8.3 核苷酸类物质生产菌的分离和选育 8.3.1 核苷酸类物质生产菌的分离 从野生菌中直接筛选核苷及核苷酸生产菌的方法主要有生长圈法和特殊平板培养法。 8.3.1.1 生长圈法 用生长圈法筛选核苷酸产生菌的机理是利用核苷酸产生菌能够促进嘌呤营养缺陷型大 肠杆菌生长，因而能形成较大的生长圈。具体方法是将非精确的嘌呤营养缺陷型大肠杆菌（如 E. Coli P64 或 B94）与不含嘌呤的琼脂混合后倒成平板，在平板表面涂布受检的细菌，在一 定条件下培养。如果被检菌能够产生嘌呤类产物，在其周围形成生长圈，然后挑选生长圈较 大的菌落进行进一步的鉴定后作为诱变育种的出发菌株。 也可以将被检菌株先在平板上培养，出现菌落时用紫外线照射杀菌。再用鸟嘌呤营养缺 陷型的枯草杆菌的固体培养基覆盖于平板上，经过一定温度下的保温培养，如果发现能够生 长的突变株，就说明它能够产生核苷类物质。 8.3.1.2 特殊平板培养法 采用含有高浓度的磷酸盐、镁盐、葡萄糖和锰盐的琼脂平板培养基也能用于筛选产核苷 酸类物质的微生物，具体的筛选步骤如下： 1） 采集哺乳动物、鸟类的粪和土壤样品。 2） 分离培养基的成分为(%)：葡萄糖 10，琼脂 2.0, KH2PO4 1.0, MgSO47H2O 1.0, CaCl22H2O 0.01, FeSO47H2O 0.001, MnSO44H2O 0.0001, 生物素 30g/L, 泛酸钙 10mg/L, 硫胺素盐