(3)将血凝板置于微量振荡器上振荡lmin。 (4)每孔加入25uL抗原致敏红细胞，在振荡器上振荡混匀，置于室温或37℃反应45~60min,观察 结果 [结果判定] 红细胞呈薄层凝集，布满整个孔底或边缘卷曲呈荷叶边状为100%凝集，记录为“++“或“#”：红 细胞呈薄层凝集，但面积较小，中心较致密，边缘松散，即为50%凝集，记录为”+“：介于上述两 者之间为75%凝集，记录为“++”；红细胞大部分集中于中央，周围有少量凝集为25%凝集，记录 为”+”。红细胞沉底呈圆点状，周围光滑，无分散凝集为0%凝集，记录为”一”。以出现50%凝集的 血清的最高稀释度作为该血清的间接血凝效价。 [注意事项] l.红细胞的选择和处理常用绵羊红细胞(sheep red blood eell,.SRBC)及人0型红细 胞。SRBC较易大量获取，血凝图谱清晰，制剂稳定，但绵羊可能有个体差异，以固定一头羊采血为 宜。更换羊时应预先进行比较和选择。此外，待测血清中有异嗜性抗体时易出现非特异性凝集，需 事先以SBC进行吸收。人0型红细胞很少出现非特异性凝集，采血后可立即使用，也可4份血加1份阿 氏液（含8.0g/L枸橼酸三钠、19.0g/L葡萄糖、4.2g/LNaC1)混匀后置4℃，1周内使用。 2.新鲜红细胞与醛化红细胞的特点新鲜红细胞用阿氏液保存于4℃，可供3周内使用， 但用新鲜红细胞致敏后，保存时间短，而且不同动物个体和不同批次来源的红细胞均有差异，影响 试验结果和分析。为了克服这一缺点，目前多采用醛化红细胞或鞣化红细胞。 3.红细胞醛化及其优点常见的醛化剂有甲醛、戊二醛和丙酮醛。醛化红细胞的优点主 要体现在：①性质稳定，不影响红细胞表面的吸附能力：②重复性好，易标准化：③可较长期保 存，醛化后4℃保存，有效期可至1年，如冻干保存，有效期则更长。 4.影响醛化的因素①红细胞的洁净程度：由于红细胞表面残留血浆蛋白和其他胶质 易引起自家凝集，所以一定要充分洗净：②红细胞的浓度：醛化时应尽量使红细胞稀释度低一些， 以减少红细胞的凝集和变形：③醛化时的温度：与醛化红细胞的质量有很大关系，一般最好是 37℃，但有人认为应于4℃进行醛化：④醛化剂的浓度和醛化次数：醛化剂的浓度过大易引起红细胞 皱褶，浓度过低又会增加溶血机会，所以一般以3%醛化浓度为宜。家禽红细胞一般醛化1或2次即 可，而哺乳动物红细胞醛化2次比醛化1次要好，敏感性高，保存时间也长。 5.影响红细胞致敏的因素 (①)要有高纯度或高效价的抗原或抗体。 (②)被致敏抗原或抗体剂量和浓度要适当。抗猪瘟IgG一般用80~160μg/L,抗口蹄疫IgG 20~40μg/mL,抗猪水疱病1gG130~160μg/mL,抗猪肺疫1gG30~40μg/L,抗猪弓形体20 ~40μg/mL,抗原一般用0.2~1.0mg/l。 (3)将血凝板置于微量振荡器上振荡1min。 (4)每孔加入25mL抗原致敏红细胞，在振荡器上振荡混匀，置于室温或37℃反应45～60min，观察 结果。 [结果判定] 红细胞呈薄层凝集，布满整个孔底或边缘卷曲呈荷叶边状为100％凝集，记录为"++++"或"#"；红 细胞呈薄层凝集，但面积较小，中心较致密，边缘松散，即为50％凝集，记录为"++"；介于上述两 者之间为75％凝集，记录为"+++"；红细胞大部分集中于中央，周围有少量凝集为25％凝集，记录 为"+"。红细胞沉底呈圆点状，周围光滑，无分散凝集为0％凝集，记录为"－"。以出现50％凝集的 血清的最高稀释度作为该血清的间接血凝效价。 [注意事项]     1．红细胞的选择和处理 常用绵羊红细胞(sheep red blood eell，SRBC)及人O型红细 胞。SRBC较易大量获取，血凝图谱清晰，制剂稳定，但绵羊可能有个体差异，以固定一头羊采血为 宜。更换羊时应预先进行比较和选择。此外，待测血清中有异嗜性抗体时易出现非特异性凝集，需 事先以SRBC进行吸收。人O型红细胞很少出现非特异性凝集，采血后可立即使用，也可4份血加1份阿 氏液(含8.Og/L枸橼酸三钠、19.Og/L葡萄糖、4.2g/L NaCl)混匀后置4℃，1周内使用。     2．新鲜红细胞与醛化红细胞的特点 新鲜红细胞用阿氏液保存于4℃，可供3周内使用， 但用新鲜红细胞致敏后，保存时间短，而且不同动物个体和不同批次来源的红细胞均有差异，影响 试验结果和分析。为了克服这一缺点，目前多采用醛化红细胞或鞣化红细胞。     3．红细胞醛化及其优点 常见的醛化剂有甲醛、戊二醛和丙酮醛。醛化红细胞的优点主 要体现在：①性质稳定，不影响红细胞表面的吸附能力；②重复性好，易标准化；③可较长期保 存，醛化后4℃保存，有效期可至1年，如冻干保存，有效期则更长。     4．影响醛化的因素 ①红细胞的洁净程度：由于红细胞表面残留血浆蛋白和其他胶质， 易引起自家凝集，所以一定要充分洗净；②红细胞的浓度：醛化时应尽量使红细胞稀释度低一些， 以减少红细胞的凝集和变形；③醛化时的温度：与醛化红细胞的质量有很大关系，一般最好是 37℃，但有人认为应于4℃进行醛化；④醛化剂的浓度和醛化次数：醛化剂的浓度过大易引起红细胞 皱褶，浓度过低又会增加溶血机会，所以一般以3％醛化浓度为宜。家禽红细胞一般醛化1或2次即 可，而哺乳动物红细胞醛化2次比醛化1次要好，敏感性高，保存时间也长。     5．影响红细胞致敏的因素     (1)要有高纯度或高效价的抗原或抗体。     (2)被致敏抗原或抗体剂量和浓度要适当。抗猪瘟IgG一般用80～160mg／mL，抗口蹄疫IgG 20～40mg／mL，抗猪水疱病IgG 130～160 mg／mL，抗猪肺疫IgG 30～40 mg／mL，抗猪弓形体20 ～40mg/mL，抗原一般用O.2～1.O mg／mL