11 蛋白激酶A,蛋白激酶C和蛋白激酶G分别依赖于 就其底物磷酸化的残基种类,它们属于 含有腺苷酸的辅酶主要有 和,其中 和 只有一个磷酸基差异,前者主要用于 后者主要用于 它们 的活性部位是 13 磷酸戊糖途径的限速酶是此途径的主要产物是 分别用于 14. Acetyl CoA形成酮体还是参加TCA循环受 浓度的调控 15 (氨基酸)和 常作为生物合成中氨的供体常作为活化甲基供体的是 碳和二碳单位的供体则是 和 四,综合题(第一题12分,2-4每题6分,共30分) 1.在体外翻译系统中,分析溶菌酶前体的合成. 分离到两种不同的mRNA,一种mRNA是野生型的,能编码整个溶菌酶前体分子,包括信号 肽,分子量位17.8kd另一种从突变体中分离而得,缺少编码信号肽的大部分序列,无信号肽 的分子量为156kd,在体外的翻译系统中,分别加入这两种RNA分子适当的缓冲液氨基酸 其中,包括[35S]甲硫氨酸以标记蛋白质最后SRP和SRP受体以及微粒体的加入,如表中所 列,混合物培养一定时间后,终止反应,免疫沉淀溶菌酶前体,经电泳和放射免疫,分析沉淀物 所获得的蛋白质分子量如下表试解释结果 mRNA种类 SRP SRP受体微粒体蛋白质(KD)编号 野生型-+-1781 +--8.02 ++-17.13 +++15.64 突变型---15.61 +-15.62 ++-15.63 +++15.64 B 为了进一步研究体外条件下,SRP和微粒体存在时,翻译产物的合成每一种mRNA分子分 别与这两种组分共培养一定时间后加入蛋白酶,在进行免疫贺电泳分析在这种条件下,只 有野生型mRNA能产生156kd的蛋白质而突变体mRNA不能合成蛋白质,为什么? 2.已知DNA的序列为 W: 5-AGCTGGTCAATGAACTGGCGTTAACGTTAAACGTTTCCCAG-3' C: 3-TCGACCAGTTACTTGACCGCAATTGCAATTTGCAAAGGGTC-511. 蛋白激酶 A,蛋白激酶 C 和蛋白激酶 G 分别依赖于___________,__________和__________, 就其底物磷酸化的残基种类,它们属于__________ 12. 含有腺苷酸的辅酶主要有_________,__________,__________和______,其中_________和 _________只有一个磷酸基差异,前者主要用于________,后者主要用于___________,它们 的活性部位是____________ 13. 磷酸戊糖途径的限速酶是_________,此途径的主要产物是_________和________,分别用于 ________和________ 14. Acetyl CoA 形成酮体还是参加 TCA 循环受_________浓度的调控 15. (氨基酸)________和___________常作为生物合成中氨的供体,常作为活化甲基供体的是 _______;碳和二碳单位的供体则是_________和__________ 四,综合题(第一题 12 分,2-4 每题 6 分,共 30 分) 1. 在体外翻译系统中,分析溶菌酶前体的合成. A. 分离到两种不同的 mRNA,一种 mRNA 是野生型的,能编码整个溶菌酶前体分子,包括信号 肽,分子量位 17.8kd;另一种从突变体中分离而得,缺少编码信号肽的大部分序列,无信号肽 的分子量为15.6kd,在体外的翻译系统中,分别加入这两种RNA分子,适当的缓冲液,氨基酸. 其中,包括[35S]甲硫氨酸以标记蛋白质,最后,SRP 和 SRP 受体以及微粒体的加入,如表中所 列,混合物培养一定时间后,终止反应,免疫沉淀溶菌酶前体,经电泳和放射免疫,分析沉淀物. 所获得的蛋白质分子量如下表.试解释结果 mRNA 种类 SRP SRP 受体 微粒体 蛋白质(KD) 编号 野生型 - + - 17.8 1 + - - 8.0 2 + + - 17.1 3 + + + 15.6 4 突变型 - - - 15.6 1 + - - 15.6 2 + + - 15.6 3 + + + 15.6 4 B. 为了进一步研究体外条件下,SRP 和微粒体存在时,翻译产物的合成,每一种 mRNA 分子分 别与这两种组分共培养一定时间后,加入蛋白酶,在进行免疫贺电泳分析,在这种条件下,只 有野生型 mRNA 能产生 15.6kd 的蛋白质.而突变体 mRNA 不能合成蛋白质,为什么? 2. 已知 DNA 的序列为: W: 5'-AGCTGGTCAATGAACTGGCGTTAACGTTAAACGTTTCCCAG-3' C: 3'-TCGACCAGTTACTTGACCGCAATTGCAATTTGCAAAGGGTC-5