(3)除鸡卵蛋白pH值采用4.6~5.1外，其他通常采用5.6~6.4，高于7.2或低于4.6均可使红 细胞发生自凝。 (4)致敏温度一般为37℃，范围是20~40℃。 (5)致敏时间一般采用30min为最适时间，具有良好的特异性和重复性。也有采用60min。 时问过长，会造成红细胞的形态不整、反应结果紊乱等。 (6)血细胞浓度一般为1%，范围为0.5%~1.5%。 6.聚苯乙烯塑料反应板的选择和处理血凝反应均在96孔微量血凝反应板上进行。反应 板有2种，一种是U型孔，一种是V型孔。一般认为V型孔凝集图谱清晰，阳性与阴性易于区别。V型孔 的角度应小于90°。反应板用前应冲洗干净，使用一段时间后应以7ol/L尿素溶液浸泡（也可用50 ~100g/L次氯酸钠、含40g/L胃蛋白酶的4%HC1或10~20g/L加酶洗衣粉溶液)，以消除非特异性 凝集。 7.对参与反应的抗原与抗体的要求 间接血凝试验时，致敏用的抗原（如细菌或病毒）应 纯化，以保证所测抗体的特异性。细菌应进行裂解或浸提，某些抗原物质性质不明或提纯不易时， 也可用粗制的器官或组织浸出液：做反向间接血凝试验时，致敏用的抗体本身应具备高效价、高特 异性、高亲和力，一般情况下可用50%、33%饱和硫酸铵盐析法提取抗血清的Y球蛋白组分用于致 敏。为提高敏感性，可进一步经离子交换层析技术提取IgG,甚至再经抗原免疫亲和层析纯化，提取 有抗体活性的1gG组分。将IgG用胃蛋白酶消化，制成F(b')2片段用于致敏，可消除一些非特异性 因素。 [临床应用] (1)测定非传染病的抗体或抗原，如类风湿抗体、自身抗体、变态反应性抗体、激素抗体、 肝癌抗原。 (②)测定传染病的抗体或抗原，己经用于一些细菌、螺旋体、支原体、病毒等传染病的抗体 检测和抗原的检测，如兽医临床上常用己知猪瘟病毒血凝抗原检测待检血清中的猪瘟抗体（属于正向 间接血凝试验)。 (3)测定寄生虫病和原虫病的抗体。 (④)测定抗毒素及外毒素，如白喉抗毒素、破伤风抗毒素的测定以及金黄色葡萄球菌肠毒素 和A、B、C、E型肉毒毒素。 [思考题] (1)正向间接血凝反应与反向间接血凝反应有何不同？ (②)间接血凝反应中哪些情况可能出现假阳性反应？ 实验四荧光抗体实验(3)除鸡卵蛋白pH值采用4.6～5.1外，其他通常采用5.6～6.4，高于7.2或低于4.6均可使红 细胞发生自凝。     (4)致敏温度一般为37℃，范围是20～40℃。     (5)致敏时间一般采用30 min为最适时间，具有良好的特异性和重复性。也有采用60 min。 时问过长，会造成红细胞的形态不整、反应结果紊乱等。     (6)血细胞浓度一般为1％，范围为0.5％～1.5％。     6．聚苯乙烯塑料反应板的选择和处理 血凝反应均在96孔微量血凝反应板上进行。反应 板有2种，一种是U型孔，一种是V型孔。一般认为V型孔凝集图谱清晰，阳性与阴性易于区别。V型孔 的角度应小于90°。反应板用前应冲洗干净，使用一段时间后应以7 mol/L尿素溶液浸泡(也可用50 ～100 g/L次氯酸钠、含40 g/L胃蛋白酶的4％HCl或10～20 g／L加酶洗衣粉溶液)，以消除非特异性 凝集。     7．对参与反应的抗原与抗体的要求 间接血凝试验时，致敏用的抗原(如细菌或病毒)应 纯化，以保证所测抗体的特异性。细菌应进行裂解或浸提，某些抗原物质性质不明或提纯不易时， 也可用粗制的器官或组织浸出液；做反向间接血凝试验时，致敏用的抗体本身应具备高效价、高特 异性、高亲和力，一般情况下可用50％、33％饱和硫酸铵盐析法提取抗血清的γ球蛋白组分用于致 敏。为提高敏感性，可进一步经离子交换层析技术提取IgG，甚至再经抗原免疫亲和层析纯化，提取 有抗体活性的IgG组分。将IgG用胃蛋白酶消化，制成F(ab’)2片段用于致敏，可消除一些非特异性 因素。 [临床应用]     (1)测定非传染病的抗体或抗原，如类风湿抗体、自身抗体、变态反应性抗体、激素抗体、 肝癌抗原。     (2)测定传染病的抗体或抗原，已经用于一些细菌、螺旋体、支原体、病毒等传染病的抗体 检测和抗原的检测，如兽医临床上常用已知猪瘟病毒血凝抗原检测待检血清中的猪瘟抗体(属于正向 间接血凝试验)。     (3)测定寄生虫病和原虫病的抗体。     (4)测定抗毒素及外毒素，如白喉抗毒素、破伤风抗毒素的测定以及金黄色葡萄球菌肠毒素 和A、B、C、E型肉毒毒素。 [思考题]     (1)正向间接血凝反应与反向间接血凝反应有何不同?     (2)间接血凝反应中哪些情况可能出现假阳性反应? 实验四 荧光抗体实验