条或几条染色体。当一些杂种细胞所含的人的染色体,加在一起含盖了人的全部染色体,即 22条常染色体,X和Y染色体时,这些杂种细胞就构成了整套杂种细胞系,可用于人的基因 定位。常用的有克隆分布板法和利用染色体异常将基因定位在染色体上具体位置的方法。例 如,利用染色体缺失进行定位。此法无需从病人体内获得有关染色体异常的细胞,而是用人 工方法在体外造成杂种细胞内特定染色体的不同位置发生断裂,形成各种类型的末端缺失, 获得一套特定染色体的缺失杂种细胞,然后通过检测缺失杂种细胞内基因产物存在与否对许 多基因进行区域定位。1986年复旦大学遗传研究所利用此法,将编码乙醇脱氢酶基因首先 定位在染色体的相应位置上 (2)原位杂交定位这是分子水平和染色体水平相结合的基因定位方法。将待定位基因的 特定DNA序列、该基因转录产生的RNA分子或RNA分子经反转录产生的cDNA作为探针,在 标记了放射性同位素或非放射性化学物质后,与变性后的染色体DNA杂交,该探针就会同染 色体DNA中与其互补的序列结合成为双链,通过放射自显影或显色技术,就可显示标记了放 射性同位素或非放射性化学物质的探针在染色体上的位置,达到基因定位的目的 (3)辐射杂种细胞基因定位这是杂种细胞基因定位法的发展。基本原理是人/鼠杂种细胞 中的人染色体是经射线处理后残留下来的带有着丝粒的染色体片段,不同的杂种细胞带有人 的不同染色体的不同长度的片段。在做基因定位时,如待测基因出现在残留的一个长片段上, 而在比该长片段更短一些的片段上消失不见,就可把该基因定位在长片段变成短片段时所丢 失的那个区域内,这样的基因定位就更为精细。为此,需要建立一系列含有不同长度的人的 各条染色体的杂种细胞。目前常用的方法是用PCR技术来确定哪条染色体或哪条染色体片段 的DNA中,含有待定位的基因,然后用电脑软件分析数据,将待测基因定位在染色体的某 位置上 (4)克隆基因定位法采用已克隆基因的cDNA探针与保留在杂种细胞内的人染色体DNA 顺序进行分子杂交,来确定克隆基因所在的染色体。例如,要定位人体白蛋白基因,需要应 用人体白蛋白基因cDNA做为探针,分别与经过HindⅢ酶切后的人体细胞和中国仓鼠卵巢细 胞(CHO)杂交。杂交后的人体细胞DNA显示6、8kb带型,CH细胞的DNA显示3、5kb带 型。进一步在含有人体4号染色体的人—CH0杂种细胞中,用Hind酶切后,再与白蛋白基 因的cDNA探针杂交,如果出现6、8kb和3、5kb带型者称为阳性杂种细胞,而不含有人 体第4号染色体的杂种细胞中只显示3、5kb带型为阴性细胞。由于人体白蛋白基因的cDNA 探针的特异性,HindⅢ杂交带只出现在含有人体4号染色体的杂种细胞中,所以将此基因定 位在4号染色体上条或几条染色体。当一些杂种细胞所含的人的染色体，加在一起含盖了人的全部染色体，即 22 条常染色体，X 和 Y 染色体时，这些杂种细胞就构成了整套杂种细胞系，可用于人的基因 定位。常用的有克隆分布板法和利用染色体异常将基因定位在染色体上具体位置的方法。例 如，利用染色体缺失进行定位。此法无需从病人体内获得有关染色体异常的细胞，而是用人 工方法在体外造成杂种细胞内特定染色体的不同位置发生断裂，形成各种类型的末端缺失， 获得一套特定染色体的缺失杂种细胞，然后通过检测缺失杂种细胞内基因产物存在与否对许 多基因进行区域定位。1986 年复旦大学遗传研究所利用此法，将编码乙醇脱氢酶基因首先 定位在染色体的相应位置上。 （2）原位杂交定位 这是分子水平和染色体水平相结合的基因定位方法。将待定位基因的 特定 DNA 序列、该基因转录产生的 RNA 分子或 RNA 分子经反转录产生的 cDNA 作为探针，在 标记了放射性同位素或非放射性化学物质后，与变性后的染色体 DNA 杂交，该探针就会同染 色体 DNA 中与其互补的序列结合成为双链，通过放射自显影或显色技术，就可显示标记了放 射性同位素或非放射性化学物质的探针在染色体上的位置，达到基因定位的目的。 （3）辐射杂种细胞基因定位 这是杂种细胞基因定位法的发展。基本原理是人/鼠杂种细胞 中的人染色体是经射线处理后残留下来的带有着丝粒的染色体片段，不同的杂种细胞带有人 的不同染色体的不同长度的片段。在做基因定位时，如待测基因出现在残留的一个长片段上， 而在比该长片段更短一些的片段上消失不见，就可把该基因定位在长片段变成短片段时所丢 失的那个区域内，这样的基因定位就更为精细。为此，需要建立一系列含有不同长度的人的 各条染色体的杂种细胞。目前常用的方法是用 PCR 技术来确定哪条染色体或哪条染色体片段 的 DNA 中，含有待定位的基因，然后用电脑软件分析数据，将待测基因定位在染色体的某一 位置上。 （4）克隆基因定位法 采用已克隆基因的 cDNA 探针与保留在杂种细胞内的人染色体 DNA 顺序进行分子杂交，来确定克隆基因所在的染色体。例如，要定位人体白蛋白基因，需要应 用人体白蛋白基因 cDNA 做为探针，分别与经过 HindⅢ酶切后的人体细胞和中国仓鼠卵巢细 胞（CHO)杂交。杂交后的人体细胞 DNA 显示 6、8 kb 带型，CHO 细胞的 DNA 显示 3、5 kb 带 型。进一步在含有人体 4 号染色体的人—CHO 杂种细胞中，用 HindⅢ酶切后，再与白蛋白基 因的 cDNA 探针杂交，如果出现 6、8 kb 和 3、5 kb 带型者称为阳性杂种细胞，而不含有人 体第 4 号染色体的杂种细胞中只显示 3、5 kb 带型为阴性细胞。由于人体白蛋白基因的 cDNA 探针的特异性，HindⅢ杂交带只出现在含有人体 4 号染色体的杂种细胞中，所以将此基因定 位在 4 号染色体上