肝微粒体制备:切除麻醉成年雄性 Sprague- Dawley大鼠新鲜肝脏,放于冰冷盐溶液 中,称重,切碎,在冰冷缓冲溶液(5 OmM PH7.4磷酸钾缓冲液,250mM蔗糖,1 mM EDTA) 中用电动匀浆机搅匀,离心(7,000g,15min,4℃),收集上清液,离心(18,500g,15min, 4℃)弃去沉淀,上清液再离心1h(85,600g,4℃),产生微粒体。将所得微粒体悬浮于250mM 蔗糖溶液中,分装于小瓶中(0.5m/瓶),一80℃下保存备用。以小牛血清蛋白作为标准用 BioRad分析方法检测蛋白浓度 用微粒体检测UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性:步骤如下:(1)微粒体混合物(最终浓度 大约0.05mg蛋白质/m),MgCl2(0.88mM),葡糖二酸单内酯(4.4mM);丙甲素 (0.022mg/ml);含不同浓度底物的50mM磷酸钾缓冲液(PH7.4);最后加入3.5mM尿甙 二磷酸葡萄糖醛酸(2)混合物在37℃孵化10~3min:(3)加λ1τoul溶液(乙腈:冰醋酸 94:6,其中含作为内标物的100uM睾丸酮)终止反应 (5)数据计算与处理 ①Caco-2细胞模型表观通透系数 Papp=△QA(Δ Q为△t内的转运量,A为膜面积,C0为初始给药浓度。吸收良好的药物的表观渗 透系数Papp>10-6cm.s2;吸收为1%~100%的药物表观渗透系数Papp.0.1×106~1 ×10cm.s2;而吸收差的药物(即吸收<1%)的Papp<10-7cm.s1 ②大鼠肠灌注模型中黄酮类物质的吸收公式如下: Mab=Qt( CAin-CAout) Q:流速(ml/min):τ:取样间隔时间30min:CAm、CAat为进口管和出口管中 苷元的浓度 ③通过小肠排泄中的量计算公式如下: Mgut=QI AMout CMu为肠腔出口代谢物浓度 ④通过胆汁排泄的变化量: Mbile=vcmbile CMl为胆汁中代谢物的浓度:V为每30min收集的胆汁体积 ⑤吸收百分比和代谢百分比以下式计算:肝微粒体制备：切除麻醉成年雄性 Sprague－Dawley 大鼠新鲜肝脏，放于冰冷盐溶液 中，称重，切碎，在冰冷缓冲溶液（50mM PH7.4 磷酸钾缓冲液，250mM 蔗糖，1mM EDTA） 中用电动匀浆机搅匀，离心（77,000g，15min，4℃），收集上清液，离心（18,500g，15min， 4℃）弃去沉淀，上清液再离心 1h（85,600g，4℃），产生微粒体。将所得微粒体悬浮于 250mM 蔗糖溶液中，分装于小瓶中（0.5ml/瓶），－80℃下保存备用。以小牛血清蛋白作为标准用 BioRad 分析方法检测蛋白浓度。 用微粒体检测 UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性：步骤如下：（1）微粒体混合物（最终浓度 大约 0.05mg 蛋白质/ml），MgCl2 （0.88mM）,葡糖二酸单内酯（4.4mM）；丙甲素 （0.022mg/ml）；含不同浓度底物的 50mM 磷酸钾缓冲液（PH7.4）；最后加入 3.5mM 尿甙 二磷酸葡萄糖醛酸(2)混合物在 37℃孵化 10～30min；（3）加入 170ul 溶液(乙腈:冰醋酸＝ 94:6，其中含作为内标物的 100uM 睾丸酮)终止反应。 (5)数据计算与处理 ①Caco- 2 细胞模型表观通透系数 Ｐapp=ΔＱ/(Δｔ·Ａ·Ｃ0) ΔＱ为Δt 内的转运量，Ａ为膜面积，Ｃ0 为初始给药浓度。吸收良好的药物的表观渗 透系数Ｐapp >10-6cｍ.s -1 ；吸收为 1%～100%的药物表观渗透系数Ｐapp 为 0 .1×10-6～1 ×10-6 cｍ.s -1；而吸收差的药物(即吸收<1%)的Ｐapp <10-7cｍ.s -1。 ②大鼠肠灌注模型中黄酮类物质的吸收公式如下： Mab=Qτ(CAin - CAout) Q：流速（ml/min）；τ：取样间隔时间 30min；CAin 、C Aout 为进口管和出口管中 苷元的浓度； ③通过小肠排泄中的量计算公式如下： Mgut=QτCMout CMout 为肠腔出口代谢物浓度 ④通过胆汁排泄的变化量： Mbile=VCMbile CMbile为胆汁中代谢物的浓度；V 为每 30min 收集的胆汁体积； ⑤吸收百分比和代谢百分比以下式计算：