3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法 4、层析: a离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定PH时,各蛋白质的电荷量及 性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析,贪象电小的蛋自质首先 被洗脱下来。 b分子筛,又称凝胶过滤。小众子蛋自质进入孔肉,滞貿时长,大分子蛋白质不能时入 孔内而径直流出 5、超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质 其密度与形态各不相同而分开 八、多肽链中氨基酸序列分析 a分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成 (蛋白质水解为个别氨基酸,测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成) 测定肽链头、尾的氨基酸残基 硝基氟苯法(DNP法) 头端 尾端羧肽酶A、B、C法等 丹酰氯法 水解肽链,分别分析 胰凝乳蛋自夔(麋蛋白酶)法:水解秃族氪基酸的羧基侧肽键 胰自釀法:水解赖氨酸、積酸的羧基侧肽键 溴化脯法:水解蛋氨酸羧基侧的肽键 Edman降解法测定各肽段的氨基酸顺序 (氨基末端氨基酸的游离a-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物,用层析法鉴定氨基 酸种类) b通过核酸推演氨基酸序列 第二章核酸的结构与功能 、核酸的分子组成:基本组成单位是核苷酸,而核苷酸则由碱基、戊糖和磷酸三种成分 连接而成 两类核酸:脱氧核糖核酸(DNA),存在于细胞核和线粒体内。 核糖核酸(RNA),存在于细胞质和细胞核内 碱基: CH3 NH2 胞嘧啶胸腺嘧啶尿嘧啶 鸟嘌呤 腺嘌呤 嘌和曦啶环史均貪有轭双键,因此对波长Q600左右的紫外光有较强吸收,这一重 要的理化性质被用于对核酸、核苷酸、核苷及碱基进行定性定量分析 2、戊糖:DNA分子的核苷酸的糖是β-D-2-脱氧核糖,RNA中为β-D-核糖。 3、磷酸:生物体内多数核苷酸的磷酸基团位于核糖的第五位碳原子上 二、核酸的一级结构 核苷酸在多肽链上的排列顺序为核酸的一级结构,核苷酸之间通过3′,5′磷酸二酯键连3 ３、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 ４、层析： a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定ＰＨ时，各蛋白质的电荷量及 性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先 被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入 孔内而径直流出。 ５、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质 其密度与形态各不相同而分开。 八、多肽链中氨基酸序列分析 a.分析纯化蛋白质的氨基酸残基组成 （蛋白质水解为个别氨基酸，测各氨基酸的量及在蛋白质中的百分组成） ↓ 测定肽链头、尾的氨基酸残基 二硝基氟苯法（DNP 法） 头端 尾端 羧肽酶Ａ、Ｂ、Ｃ法等 丹酰氯法 ↓ 水解肽链，分别分析 胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的羧基侧肽键 胰蛋白酶法：水解赖氨酸、精氨酸的羧基侧肽键 溴化脯法：水解蛋氨酸羧基侧的肽键 ↓ Edman 降解法测定各肽段的氨基酸顺序 （氨基末端氨基酸的游离α-氨基与异硫氰酸苯酯反应形成衍生物，用层析法鉴定氨基 酸种类） b.通过核酸推演氨基酸序列。 第二章 核酸的结构与功能 一、核酸的分子组成：基本组成单位是核苷酸，而核苷酸则由碱基、戊糖和磷酸三种成分 连接而成。 两类核酸：脱氧核糖核酸（DNA），存在于细胞核和线粒体内。 核糖核酸（RNA），存在于细胞质和细胞核内。 １、碱基： NH2 NH2 O CH3 O O O O O NH2 胞嘧啶 胸腺嘧啶 尿嘧啶 鸟嘌呤 腺嘌呤 嘌呤和嘧啶环中均含有共轭双键，因此对波长 260nm 左右的紫外光有较强吸收，这一重 要的理化性质被用于对核酸、核苷酸、核苷及碱基进行定性定量分析。 ２、戊糖：DNA 分子的核苷酸的 糖是β-D-2-脱氧核糖，RNA 中为β-D-核糖。 ３、磷酸：生物体内多数核苷酸的磷酸基团位于核糖的第五位碳原子上。 二、核酸的一级结构 核苷酸在多肽链上的排列顺序为核酸的一级结构，核苷酸之间通过 3′，5′磷酸二酯键连 接