协和医学杂志 新型冠状病毒肺炎( coronavirus disease19,原、抗体、激素等检测。该法灵敏度高于ELSA,具 OVID-19)是由2019新型冠状病毒(2019 novel coro-有特异性高、线性范围宽、结果稳定、操作简化等特 lavers,2019-nCoV)感染引起的以肺部病变为主的新点,广泛应用于临床标本的检测 发传染病,可引起消化系统和神经系统的损伤,严重2.3胶体金免疫层析法 者可导致死亡。2019年12月以来,疫情进展迅速 胶体金免疫层析法( colloidal gold immunochrom 截至2020年2月26日24时,我国(港澳台地区除外) tographic assay,GICA)是以胶体金为示踪标志物 累计报告确诊病例78497例,死亡病例2744例,全球应用于抗原抗体检测的一种新型免疫标记技术,无需 疫情亦趋于严峻。目前暂无针对2019-nCoV的有效治特殊处理标本,仅需一滴血即可在15min内通过肉 疗药物,疫苗也处于临床试验阶段,早期诊断、及时眼观察获取检测结果。该方法突破了现有检测技术对 收治患者对有效控制疫情至关重要[2 人员、场所的限制,缩短检测时间,操作方便快速 《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》在基层医疗单位及现场检测中广泛使用。 推荐实时荧光 RT-PCR检测2019-nCoV核酸阳性是疑 似病例确诊的诊断条件之一,但该技术对实验场3抗体检测的灵敏度和特异度 所及人员要求高、操作繁琐、耗时长,检测人员感染 风险高,结果受标本质量、实验条件及人员操作等因 灵敏度反映诊断试验检出感染者的能力,若过 素影响较大凵,核酸单项检测并不能满足排査诊断低,会出现较多假阴性结果,影响疾病的诊断、干预 的要求。作为机体免疫系统抵抗病毒的重要效应分和预后,严重可导致患者过早死亡;特异度衡量诊断 子,血清特异性抗体是诊断感染的另一关键证据。抗试验正确判断非感染者的能力,若过低,则会出现较 体检测的操作简单便捷,对实验环境及人员要求不甚多假阳性结果,导致医疗资源的浪费,并造成患者及 苛刻,仅需采集血液标本,很大程度上降低医护人员群众的焦虑和恐慌。因此,具有较高灵敏度和特异度 在标本采集和检测过程中被感染的风险,是快速筛查是抗体检测技术的应用基础 和核酸辅助诊断的重要手段。 3.1灵敏度 抗体检测的灵敏度主要取决于抗体亲和力、检测 1抗体产生特点 方法及操作。 3.1.1抗体亲和力 机体在接触病毒时,IgM抗体产生最早,但浓度 指抗体与抗原的结合能力或强度,lgG亲和力 低、维持时间短、亲和力较低,是急性期感染的诊断高于lgM,免疫结合既快又牢固,不易解离121。此 指标;IgG产生晚,但浓度高、维持时间长、亲和力外,与单一IgM或lgG抗体检测相比,lM-lgG联合 高,血清I阳性提示感染中后期或既往感染6。检测具有更高的实用性和敏感性,可有效提高检出 效率。 2抗体血清学检测方法 3.1.2检测方法 (1)标记材料:常用的标记物胶体金吸附抗体量 目前临床中常用的抗体血清学检测方法有3种。较少,限制了检测灵敏度,建议采用与抗体共价结合 2.1酶联免疫吸附试验法 的材料,如量子点、吖啶酯,微球等{。(2)信号 酶联免疫吸附试验( enzyme linked immunosorbent放大系统:选择高发光强度标记物(如菲罗晽钌掺 sasy,EL丶A)是将抗原或抗体包被在固相载体表杂的二氧化硅纳米粒子、金纳米花),或添加增敏剂 面,利用酶标记的抗体或抗原结合待检物,并根据酶(如氯金酸和盐酸羟胺),标记材料的粒径也会对灵 催化底物产生的有色产物颜色深浅及有无进行分析的敏度造成一定影响1。(3)试纸条:GCA中,硝 种定性或半定量检测方法閃。该检测方法灵敏度酸纤维素膜的孔径、疏水性、亲水性等会影响检测灵 较高,载体标准化难度较低,但检测速度慢、易污敏度[168。(4)缓冲液体系:合适的缓冲液体系可 染、步骤较为繁琐{ 稳定抗原抗体的结合能力和抗干扰能力,提高灵 2.2化学发光免疫分析法 敏度。 化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测3.1.3检测操作 定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗 (1)浓缩样品:通过浓缩方法增加样品浓度。协 和 医 学 杂 志 ２ 新 型 冠 状 病 毒 肺 炎 ( ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ １９ꎬ ＣＯＶＩＤ￣ １９) 是由 ２０１９ 新型冠状病毒 (２０１９ ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏ￣ ｎａｖｉｒｕｓꎬ ２０１９￣ｎＣｏＶ) 感染引起的以肺部病变为主的新 发传染病ꎬ 可引起消化系统和神经系统的损伤ꎬ 严重 者可导致死亡[１] ꎮ ２０１９ 年 １２ 月以来ꎬ 疫情进展迅速ꎬ 截至 ２０２０ 年 ２ 月 ２６ 日 ２４ 时ꎬ 我国 (港澳台地区除外) 累计报告确诊病例 ７８ ４９７ 例ꎬ 死亡病例 ２ ７４４ 例ꎬ 全球 疫情亦趋于严峻ꎮ 目前暂无针对 ２０１９￣ｎＣｏＶ 的有效治 疗药物ꎬ 疫苗也处于临床试验阶段ꎬ 早期诊断、 及时 收治患者对有效控制疫情至关重要[２] ꎮ «新型冠状病毒肺炎诊疗方案 (试行第六版) » 推荐实时荧光 ＲＴ￣ＰＣＲ 检测 ２０１９￣ｎＣｏＶ 核酸阳性是疑 似病例确诊的诊断条件之一[３] ꎬ 但该技术对实验场 所及人员要求高、 操作繁琐、 耗时长ꎬ 检测人员感染 风险高ꎬ 结果受标本质量、 实验条件及人员操作等因 素影响较大[４] ꎬ 核酸单项检测并不能满足排查诊断 的要求ꎮ 作为机体免疫系统抵抗病毒的重要效应分 子ꎬ 血清特异性抗体是诊断感染的另一关键证据ꎮ 抗 体检测的操作简单便捷ꎬ 对实验环境及人员要求不甚 苛刻ꎬ 仅需采集血液标本ꎬ 很大程度上降低医护人员 在标本采集和检测过程中被感染的风险ꎬ 是快速筛查 和核酸辅助诊断的重要手段[５] ꎮ １ 抗体产生特点 机体在接触病毒时ꎬ ＩｇＭ 抗体产生最早ꎬ 但浓度 低、 维持时间短、 亲和力较低ꎬ 是急性期感染的诊断 指标ꎻ ＩｇＧ 产生晚ꎬ 但浓度高、 维持时间长、 亲和力 高ꎬ 血清 ＩｇＧ 阳性提示感染中后期或既往感染[６￣７] ꎮ ２ 抗体血清学检测方法 目前临床中常用的抗体血清学检测方法有 ３ 种ꎮ ２􀆰 １ 酶联免疫吸附试验法 酶联免疫吸附试验 ( ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙꎬ ＥＬＩＳＡ) 是将抗原或抗体包被在固相载体表 面ꎬ 利用酶标记的抗体或抗原结合待检物ꎬ 并根据酶 催化底物产生的有色产物颜色深浅及有无进行分析的 一种定性或半定量检测方法[８] ꎮ 该检测方法灵敏度 较高ꎬ 载体标准化难度较低ꎬ 但检测速度慢、 易污 染、 步骤较为繁琐[９] ꎮ ２􀆰 ２ 化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法是将高灵敏度的化学发光测 定技术与高特异性的免疫反应相结合ꎬ 用于各种抗 原、 抗体、 激素等检测ꎮ 该法灵敏度高于 ＥＬＩＳＡꎬ 具 有特异性高、 线性范围宽、 结果稳定、 操作简化等特 点ꎬ 广泛应用于临床标本的检测[１０￣１１] ꎮ ２􀆰 ３ 胶体金免疫层析法 胶体金免疫层析法 ( ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍ￣ ｔｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓａｙꎬ ＧＩＣＡ) 是以胶体金为示踪标志物ꎬ 应用于抗原抗体检测的一种新型免疫标记技术ꎬ 无需 特殊处理标本ꎬ 仅需一滴血即可在 １５ ｍｉｎ 内通过肉 眼观察获取检测结果ꎮ 该方法突破了现有检测技术对 人员、 场所的限制ꎬ 缩短检测时间ꎬ 操作方便快速ꎬ 在基层医疗单位及现场检测中广泛使用[１０] ꎮ ３ 抗体检测的灵敏度和特异度 灵敏度反映诊断试验检出感染者的能力ꎬ 若过 低ꎬ 会出现较多假阴性结果ꎬ 影响疾病的诊断、 干预 和预后ꎬ 严重可导致患者过早死亡ꎻ 特异度衡量诊断 试验正确判断非感染者的能力ꎬ 若过低ꎬ 则会出现较 多假阳性结果ꎬ 导致医疗资源的浪费ꎬ 并造成患者及 群众的焦虑和恐慌ꎮ 因此ꎬ 具有较高灵敏度和特异度 是抗体检测技术的应用基础ꎮ ３􀆰 １ 灵敏度 抗体检测的灵敏度主要取决于抗体亲和力、 检测 方法及操作ꎮ ３􀆰 １􀆰 １ 抗体亲和力 指抗体与抗原的结合能力或强度ꎬ ＩｇＧ 亲和力 高于 ＩｇＭꎬ 免疫结合既快又牢固ꎬ 不易解离[１２] ꎮ 此 外ꎬ 与单一 ＩｇＭ 或 ＩｇＧ 抗体检测相比ꎬ ＩｇＭ￣ＩｇＧ 联合 检测具有更高的实用性和敏感性ꎬ 可有效提高检出 效率[１３] ꎮ ３􀆰 １􀆰 ２ 检测方法 (１) 标记材料: 常用的标记物胶体金吸附抗体量 较少ꎬ 限制了检测灵敏度ꎬ 建议采用与抗体共价结合 的材料ꎬ 如量子点、 吖啶酯ꎬ 微球等[１４￣１５] ꎮ (２) 信号 放大系统: 选择高发光强度标记物 (如菲罗啉钌掺 杂的二氧化硅纳米粒子、 金纳米花)ꎬ 或添加增敏剂 (如氯金酸和盐酸羟胺)ꎬ 标记材料的粒径也会对灵 敏度造成一定影响[１６￣１８] ꎮ (３) 试纸条: ＧＩＣＡ 中ꎬ 硝 酸纤维素膜的孔径、 疏水性、 亲水性等会影响检测灵 敏度[１６ꎬ１８] ꎮ (４) 缓冲液体系: 合适的缓冲液体系可 稳定抗原抗体的结合能力和抗干扰能力ꎬ 提高灵 敏度ꎮ ３􀆰 １􀆰 ３ 检测操作 (１) 浓缩样品: 通过浓缩方法增加样品浓度ꎮ