方法 技术优点 技术缺点 ①最初的PCR技术所采用的核酸染料 会对实验人员和环境造成伤害 种用于放大扩增特定的DNA 第一代 ②P(CR完成之后需要开盖检测 片段的分子生物学技术，可看作 PCR 容易发生污染造成假阳性结果 是生物体外的特殊DNA复制 ③检测耗时长，操作麻烦，容易出错 ④只能做定性检测 ①不同厂家的试剂和设备所产生的Cq值 有一定差异，不具可比性 ①污染风险低 第二代 ②存在背景值影响，结果易产生偏差 ②操作流程更简单、经济高效 q-PCR ③低拷贝DNA往往难以检测 ③样品加样量少 ④当反应体系中有PCR抑制物存在时 常规的PCR体系经常会受到影响 ①灵敏度更高：dPCR将传统 ①模板质量要求较高：dPCR的模板童超过 PCR反应分割成了数万个体系， 微体系量会导致无法定量，过少会导致信号 这些体系独立扩增与检测 过低，降低定量准确度 第三代 ②定量更准确 ②非特异性产物的判断：无论PCR产物是 d-PCR ③抗千扰能力更强：dPCR检测 否是特异性产物，只要荧光信号足够强，也 的是终点荧光，即使微体系稍微 是会判读为阳性结果。因此dPCR的引物特 影响，也不影响最终结果的荆读 异性要求极高