染色液 0.1%考马斯亮蓝R250 40%甲醇 10%冰醋酸 染色1~2小时或过夜 脱色液: 10%甲醇 10%冰醋酸 脱色需3~10小时,其间更换多次脱色液至背景清楚。 此方法检测灵敏度为0.2~1.0μg。脱色后,可将凝胶浸于水中,长期封装在塑料袋内 而不降低染色强度。为永久性记录,可对凝胶进行拍照,或将凝胶干燥成胶片 4.测量并计算分子量 蛋白质的分子量与它的电泳迁移有一定关系式,经37种蛋白的测定得到以下的关系式: 1w=K(10-m) IgMw=IgK -bm=KI-bm 其中M是蛋白质分子量;K和K1为常数 b为斜率,m是电泳迁移率,实际使用的是相对迁移率mRs 如果用几种标准蛋白质分子量的对数作纵坐标,用各自的相对迁移率作横坐标,即可画 出一条斜率为负的标准曲线。相对迁移率为 其中,dr、dapg分别为样品和BPB(溴酚兰)以分离胶表面为起点迁移的距离。 欲求未知蛋白的分子量,只需求出它的相对迁移率: mR未=dpr/dPB 然后,从标准曲线上就可求出此未知蛋白的分子量 取出脱色后的凝胶平放在两块透明投影胶片中间,赶尽气泡,在复印机上复印。在复印 的凝胶图上用直尺分别量出各条蛋白带迁移的距离dpr和dpPB(以蛋白带的上沿或中心为 准),计算相对迁移率,根据方程式: 用各标准蛋白分子量的对数(纵坐标)和相对迁移率mR(横坐标)画出标准曲线,由 标准曲线再求出其他各条待测和未知蛋白带的分子量,如有可能计算其误差。193 染色液： 0.1% 考马斯亮蓝 R250 40% 甲醇 10% 冰醋酸 染色 1～2 小时或过夜。 脱色液： 10% 甲醇 10% 冰醋酸 脱色需 3～10 小时，其间更换多次脱色液至背景清楚。 此方法检测灵敏度为 0.2～1.0 g。脱色后，可将凝胶浸于水中，长期封装在塑料袋内 而不降低染色强度。为永久性记录，可对凝胶进行拍照，或将凝胶干燥成胶片。 4. 测量并计算分子量 蛋白质的分子量与它的电泳迁移有一定关系式，经 37 种蛋白的测定得到以下的关系式： Mw ＝ K (10－bm) (1) lgMw = lg K －bm = K1－bm (2) 其中 Mw 是蛋白质分子量；K 和 K1 为常数 b 为斜率，m 是电泳迁移率，实际使用的是相对迁移率 mR。 如果用几种标准蛋白质分子量的对数作纵坐标，用各自的相对迁移率作横坐标，即可画 出一条斜率为负的标准曲线。相对迁移率为： 其中，dpr、dBPB分别为样品和 BPB（溴酚兰）以分离胶表面为起点迁移的距离。 欲求未知蛋白的分子量，只需求出它的相对迁移率： mR 未= dpr 未/ dBPB 然后，从标准曲线上就可求出此未知蛋白的分子量。 取出脱色后的凝胶平放在两块透明投影胶片中间，赶尽气泡，在复印机上复印。在复印 的凝胶图上用直尺分别量出各条蛋白带迁移的距离 dpr 和 dBPB（以蛋白带的上沿或中心为 准），计算相对迁移率，根据方程式： lgMw = K1－bmR 用各标准蛋白分子量的对数（纵坐标）和相对迁移率 mR（横坐标）画出标准曲线，由 标准曲线再求出其他各条待测和未知蛋白带的分子量，如有可能计算其误差。 BPB pr R d d m =