间接血凝试验(indirect haemagglutination test,IHAT)亦称被动血凝试验(passive haemagglutination assay,PHA),是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体，在与相 应抗体反应时出现肉眼可见凝集。如将抗体致敏于红细胞表面，用以检测样本中相应抗原，致敏红 细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接血凝试验(reverse passive heamagglutination assay,.RPHA)。 [目的要求] 1.掌握间接血凝试验的原理、操作方法及结果判定。 2.了解红细胞致敏的方法。 [材料与试剂们 1.红细胞，常用绵羊红细胞及人0型红细胞： 2.96孔聚苯乙烯塑料反应板： 3。已知抗原、待检血清、标准阳性血清与阴性血清： 4.醛化剂（戊二醛）： 5.0.2%p5.2醋酸缓冲液： 6.0.11mol/LpH7.2PS液。 [实验内容及操作方法] 1.醛化SRBC的制备无菌采集绵羊血，玻璃珠脱纤抗凝，沉集绵羊红细胞用10~20倍体 积的0.11mol/LpH7.2PBS洗涤4~6次，最终配成10%细胞悬液，预冷到4℃后放于冰箱，缓慢加入 等量的1%戊二醛（用0.11mol/LpH7.2PBS配制）并继续摇动30~60min,然后用PBS洗5次，最后用 PBS配成10%的悬液，加入0.01%NaN3防腐，4℃冰箱保存备用。 2.醛化SRBC的致敏 (1)用0.11mol/LpH7.2PBS将10%的醛化红细胞洗涤2次，每次以3000r/min离心10min, 最后用0.2%p5.2醋酸缓冲液配制成5%的悬液，置于37℃水浴中预热。 (2)以0.2%p5.2醋酸缓冲液稀释抗原（最适浓度经预试验确定），置于37℃水浴中预热。 (3)在5%红细胞悬液中加入等体积的抗原溶液混匀，置37℃水浴中作用30min,每隔5min振 荡混匀一次。 (4)以3000r/min离心10min,用稀释液将致敏红细胞洗涤3次，最后配成1%致敏红胞悬液，备 用。 3.间接血凝试验（微量法）的具体操作步骤 (1)用微量加样器在V型血凝板上每孔加入25uL稀释液。 (2)取25uL待检血清加入到第1孔，混合4或5次，取出25uL置入第2孔进行混匀，依次到第11 孔，取出25L弃掉。第12孔留作红细胞对照，同时设立阳性血清与阴性血清对照。间接血凝试验(indirect haemagglutination test，IHAT)亦称被动血凝试验(passive haemagglutination assay，PHA)，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体，在与相 应抗体反应时出现肉眼可见凝集。如将抗体致敏于红细胞表面，用以检测样本中相应抗原，致敏红 细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接血凝试验(reverse passive heamagglutination assay，RPHA)。 [目的要求]     1．掌握间接血凝试验的原理、操作方法及结果判定。 2．了解红细胞致敏的方法。 [材料与试剂]     1．红细胞，常用绵羊红细胞及人O型红细胞；     2．96孔聚苯乙烯塑料反应板；     3．已知抗原、待检血清、标准阳性血清与阴性血清；     4．醛化剂(戊二醛)；     5．0.2％ pH5.2醋酸缓冲液； 6．0.11mol／L pH7.2 PBS液。 [实验内容及操作方法]     1．醛化SRBC的制备 无菌采集绵羊血，玻璃珠脱纤抗凝，沉集绵羊红细胞用10～20倍体 积的0.11mol／L pH7.2 PBS洗涤4～6次，最终配成10％细胞悬液，预冷到4℃后放于冰箱，缓慢加入 等量的1％戊二醛(用0.11mol／L pH7.2 PBS配制)并继续摇动30～60min，然后用PBS洗5次，最后用 PBS配成10％的悬液，加入0.01％NaN3防腐，4℃冰箱保存备用。     2．醛化SRBC的致敏     (1)用0.11mol／L pH7.2 PBS将10％的醛化红细胞洗涤2次，每次以3000r／min离心10min， 最后用0.2％ pH5.2醋酸缓冲液配制成5％的悬液，置于37℃水浴中预热。     (2)以0.2％ pH5.2醋酸缓冲液稀释抗原(最适浓度经预试验确定)，置于37℃水浴中预热。     (3)在5％红细胞悬液中加入等体积的抗原溶液混匀，置37℃水浴中作用30min，每隔5min振 荡混匀一次。 (4)以3000r／min离心10min，用稀释液将致敏红细胞洗涤3次，最后配成1％致敏红胞悬液，备 用。     3．间接血凝试验(微量法)的具体操作步骤     (1)用微量加样器在V型血凝板上每孔加入25mL稀释液。     (2)取25mL待检血清加入到第1孔，混合4或5次，取出25mL置入第2孔进行混匀，依次到第11 孔，取出25mL弃掉。第12孔留作红细胞对照，同时设立阳性血清与阴性血清对照