酶切反应中应注意以下几个问题： １．内切酶：  不应混有其它杂蛋白特别是其它内切酶或外切酶的污染；  注意内切酶的识别位点及形成的粘性末端；  内切酶的用量 根据内切酶单位和ＤＮＡ用量而定，通常 1u指在适当条件下，1小时内完全酶解１ug特定ＤＮＡ底物 所需要的限制性内切酶量，使用中一般以１ug DNA对２－ ３u酶短时间为宜。  同时内切酶体积不能超过反应体系１０％，因内切酶中含５ ０％甘油，体系中甘油超过５％会抑制内切酶活力；  内切酶操作应在低温下进行（冰上）；使用时防止操作中对 内切酶的污染。酶切反应中应注意以下几个问题： １．内切酶：  不应混有其它杂蛋白特别是其它内切酶或外切酶的污染；  注意内切酶的识别位点及形成的粘性末端；  内切酶的用量 根据内切酶单位和ＤＮＡ用量而定，通常 1u指在适当条件下，1小时内完全酶解１ug特定ＤＮＡ底物 所需要的限制性内切酶量，使用中一般以１ug DNA对２－ ３u酶短时间为宜。  同时内切酶体积不能超过反应体系１０％，因内切酶中含５ ０％甘油，体系中甘油超过５％会抑制内切酶活力；  内切酶操作应在低温下进行（冰上）；使用时防止操作中对 内切酶的污染