(6)二甲苯5min (7)二甲苯5min。 (8)盖玻片下中性树胶封固。 结果细胞核被苏木素染为蓝色,细胞浆、肌纤维、胶原纤维、红细胞被伊红染成不同程度的红色。 三)染色时应注意事项 制作出优质的H染色切片,绝非仅指染色而言,它包括很多方面,首先应重视固定环节,其次注意脱水、 透明、组织浸蜡、包埋和切片等各个步骤。因固定、脱水等步骤有所缺陷的切片,染色是不可能鲜艳、透明、层 次分明的。解决上述各细节问题的方法已在前面各章节中均提到过。但在进行HE染色时还应注意以下问题 1组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分,若溶蜡剂使用过久 应及时更换以免效率降低,若室温过低,必须将切片放置温箱中预热(使切片上的石蜡熔化),或可将溶蜡剂置 于温箱中进行脱蜡。 2苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物,这可能是液体表面的过氧化物,因此,在每次染苏 木素之前应该过滤或用纸把液面上的氧化膜拖走,以免污染切片。苏木素染色后,不宜在水中停留较长时间,防 止染色质变蓝后,而不易用盐酸乙醇分化。苏木素液一般染过三、四百张切片后,着色力会减弱,着色不鮮艳, 呈灰蓝色时应及时更换新液 染色的时间长短需根据染剂对组织的染色作用、室温条件、切片厚薄、固定液的类别、染液的新旧而进行 调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间 4分化十分重要。染色时将苏木精先适当过染,再经盐酸乙醇脱去胞质之苏木素颜色和核内多余的染液的过 程叫分化。分化步骤的准确也是染色成败的关键,分化处理恰当,即核的颜色达到适宜程度,应立即终止分化, 盐酸乙醇分化,必须严格掌握时间,不同的组织、切片厚度和苏木素染色深浅来决定分化时间。一般是2-3s,当过 切片由深蓝色变成红色至粉红色时,立即将切片置入自来水中终止分化(可经光学显微镜下观察胞核是否清 晰,胞浆呈淡白色)。如过染的切片分化过度时核呈褪色状,颜色灰淡,仅能看岀轮廓甚至模糊不清;分化不足 时则胞核过深,使核浆的境界不清,不能辨认出核膜及染色质的形态结构特点,细胞质背景仍有浅蓝色,这样经 伊红染色后,细胞质称红紫色。 5苏木素过染后经盐酸乙醇分化后呈红紫色,粉红色,再用弱碱性水溶液处理,使其由浅色变成鮮艳的蓝 色,称为返蓝。返蓝除碳酸锂饱和溶液外,尚可用氨水,如染色不受时间限制,最好用弱碱性流水返蓝,冲洗数 小时,使核的染色更佳。返蓝液不宜过浓,若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。 6伊红宜淡染,复染过深胞核不清晰。新配制的伊红浸染1-2min即可。伊红染色时间、染色液浸染程度应以 苏木素对核着色程度为参照标准,以求达到对比鮮明,当胞核过淡而胞质过红时造成以红盖蓝,反之核过浓染而 胞质过淡均影响观察。因此要对比色彩相适宜为佳。 7若脱水、透明等步骤不够彻底,则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象,应立即更换无水乙醇脱水, 再次透明。在潮湿的季节里应注意乙醇的浓度,若降低要及时更换。 封固剂要适量,滴加时应小心倾滴,滴加的中性树胶不宜太多,以免加盖玻片后外溢,也不要太少,以免 加上盖玻片后封盖不佳,影响切片保存。中性树胶浓度应适宜,过稀容易溢岀玻片,当树胶内的二甲苯挥发后, 树胶干燥浓缩后产生气泡,中性树胶过浓稠,滴后不易扩散,如有气泡产生,可轻轻加压驱除。或返回二甲苯内 小心取下盖玻片重新封固。盖玻片大小选择要合适,一般要大于组织块,以防封盖不全,标签贴牢,编号清楚 9染好的切片应妥为保存,登记归档,按顺序分类,避免日光照射,否则切片容易褪色。(6)二甲苯I 5min。 (7)二甲苯II 5min。 (8)盖玻片下中性树胶封固。 结果细胞核被苏木素染为蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维、红细胞被伊红染成不同程度的红色。 （三）染色时应注意事项 制作出优质的HE染色切片，绝非仅指染色而言，它包括很多方面，首先应重视“固定”环节，其次注意脱水、 透明、组织浸蜡、包埋和切片等各个步骤。因固定、脱水等步骤有所缺陷的切片，染色是不可能鲜艳、透明、层 次分明的。解决上述各细节问题的方法已在前面各章节中均提到过。但在进行HE染色时还应注意以下问题： 1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则无论进行那种染色都会发生困难。脱蜡时间要充分，若溶蜡剂使用过久 应及时更换以免效率降低，若室温过低，必须将切片放置温箱中预热（使切片上的石蜡熔化），或可将溶蜡剂置 于温箱中进行脱蜡。 2.苏木素染液使用一段时间后表面易出现亮晶状飘浮物，这可能是液体表面的过氧化物，因此，在每次染苏 木素之前应该过滤或用纸把液面上的氧化膜拖走，以免污染切片。 苏木素染色后，不宜在水中停留较长时间，防 止染色质变蓝后，而不易用盐酸乙醇分化。苏木素液一般染过三、四百张切片后，着色力会减弱，着色不鲜艳， 呈灰蓝色时应及时更换新液。 3.染色的时间长短需根据染剂对组织的染色作用、室温条件、切片厚薄、固定液的类别、染液的新旧而进行 调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。 4.分化十分重要。染色时将苏木精先适当过染，再经盐酸乙醇脱去胞质之苏木素颜色和核内多余的染液的过 程叫分化。分化步骤的准确也是染色成败的关键，分化处理恰当，即核的颜色达到适宜程度，应立即终止分化， 盐酸乙醇分化，必须严格掌握时间，不同的组织、切片厚度和苏木素染色深浅来决定分化时间。一般是2-3s,当过 染切片由深蓝色变成红色至粉红色时，立即将切片置入自来水中终止分化（可经光学显微镜下观察胞核是否清 晰，胞浆呈淡白色）。如过染的切片分化过度时核呈褪色状，颜色灰淡，仅能看出轮廓甚至模糊不清；分化不足 时则胞核过深，使核浆的境界不清，不能辨认出核膜及染色质的形态结构特点，细胞质背景仍有浅蓝色，这样经 伊红染色后，细胞质称红紫色。 5.苏木素过染后经盐酸乙醇分化后呈红紫色，粉红色，再用弱碱性水溶液处理，使其由浅色变成鲜艳的蓝 色，称为返蓝。返蓝除碳酸锂饱和溶液外，尚可用氨水，如染色不受时间限制，最好用弱碱性流水返蓝，冲洗数 小时，使核的染色更佳。返蓝液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。 6.伊红宜淡染，复染过深胞核不清晰。 新配制的伊红浸染1-2min即可。伊红染色时间、染色液浸染程度应以 苏木素对核着色程度为参照标准，以求达到对比鲜明，当胞核过淡而胞质过红时造成以红盖蓝，反之核过浓染而 胞质过淡均影响观察。因此要对比色彩相适宜为佳。 7.若脱水、透明等步骤不够彻底，则组织表面会有一层雾状膜。若有这一现象，应立即更换无水乙醇脱水， 再次透明。在潮湿的季节里应注意乙醇的浓度，若降低要及时更换。 8.封固剂要适量，滴加时应小心倾滴，滴加的中性树胶不宜太多，以免加盖玻片后外溢，也不要太少，以免 加上盖玻片后封盖不佳，影响切片保存。中性树胶浓度应适宜，过稀容易溢出玻片，当树胶内的二甲苯挥发后， 树胶干燥浓缩后产生气泡，中性树胶过浓稠，滴后不易扩散，如有气泡产生，可轻轻加压驱除。或返回二甲苯内 小心取下盖玻片重新封固。盖玻片大小选择要合适，一般要大于组织块，以防封盖不全，标签贴牢，编号清楚。 9.染好的切片应妥为保存，登记归档，按顺序分类，避免日光照射，否则切片容易褪色