Transfer capillary 体输卵管内受精卵的收集与处理 Capillary holder Mouth pie 1)用眼科摄撕开输卵管膨大的壶腹部，即看到包绕受精卵 的丘细胞团。游离的受精卵慢慢流出，也可以用镊子轻轻挤 Sterile filter 压输卵管将受精卵推出裂口。 ubing 2)全部卵群取出后，将其转移到一个约200u1的液滴中 加入10-15ul的500U/ml透明质酸酶(hyaluronidase)消化 颗粒细胞，约30秒-1分钟，必要时用毛细管吹打卵群数次。 b 如颗粒细胞全部脱落，则开始清洗步骤；如仍有部分未脱落 则再等待数十秒直到全部脱落。 3)洗涤：用玻璃细管（直径约120um-250um,即大于一个 受精卵的直径而小于二个受精卵的直径)把受精卵在新的M2 液滴中转移五次，洗去颗粒细胞、残渣及透明质酸酶，将洗 M2 medium 好的受精卵转移到覆盖有矿物油（可防止污染同时防止培养 基水分蒸发影响pH)的M16液滴（在5%CO2、37℃培养箱 中平衡过夜，保证正确pH值)中，再放入5%C02、37℃ 培养箱中备用。 体输卵管内受精卵的收集与处理 1） 用眼科镊撕开输卵管膨大的壶腹部，即看到包绕受精卵 的丘细胞团。游离的受精卵慢慢流出，也可以用镊子轻轻挤 压输卵管将受精卵推出裂口。 2） 全部卵群取出后，将其转移到一个约 200ul 的液滴中， 加入 10-15ul 的 500U/ml 透明质酸酶（hyaluronidase）消化 颗粒细胞，约30秒-1分钟，必要时用毛细管吹打卵群数次。 如颗粒细胞全部脱落，则开始清洗步骤；如仍有部分未脱落 则再等待数十秒直到全部脱落。 3） 洗涤：用玻璃细管（直径约120um-250um，即大于一个 受精卵的直径而小于二个受精卵的直径）把受精卵在新的 M2 液滴中转移五次，洗去颗粒细胞、残渣及透明质酸酶，将洗 好的受精卵转移到覆盖有矿物油（可防止污染同时防止培养 基水分蒸发影响pH）的 M16 液滴（在 5%CO2、37℃培养箱 中平衡过夜，保证正确 pH 值）中，再放入 5%CO2、37℃ 培养箱中备用