实验四甲醛滴定法测定氨基氮 一.目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。 三原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡 R-CH-C00≥R-CH-C00+H NH3 NH2 基酸 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使 -NH释放T,使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内(PH9.0左右)。因 此可用酚酞作指示剂，用标淮氢氧化钠溶液滴定。 R-CH-C0OR-CH-C00+H NaOH 之中和 12 HCHO R-CH-000 HCHO R-CH-C0O- N(CH20H)2 如样品为一种己知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氨的含量。如样品为多种氨 基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速， 常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明 水解作用已完全。 三仪器、试剂、材料 1.仪器 25ml锥形瓶：3ml微量滴定管：吸管：研体 2.试剂 (1)300ml0.05molL标准甘氨酸溶液 准确称取375mg甘氨酸，溶解后定容至100ml。 (2)500ml0.02mol/L标准氢氧化钠溶液 (3)20ml酚指示剂 0.5%酚酞的50%乙醇溶液 (4)400ml中性甲醛溶液 在50ml36-37%分析纯甲醛溶液中加入1ml0.5%酚酞乙醇水溶液，用 0.02moL的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。 实验四 甲醛滴定法测定氨基氮 一.目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。 二. 原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： －NH3 是弱酸，完全解离时 PH 为 11－12 或更高，若用碱滴定－NH3 所释放的 H ＋来测定氨 基酸，一般指示剂变色域小于 10，很难准确指示滴定终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使 －NH3 释放 H ＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0 左右）。因 此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨 基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速， 常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明 水解作用已完全。 三. 仪器、试剂、材料 1. 仪器 25ml 锥形瓶；3ml 微量滴定管；吸管；研钵。 2. 试剂 (1) 300ml 0.05mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取 375mg 甘氨酸，溶解后定容至 100ml。 (2) 500ml 0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液 (3) 20ml 酚酞指示剂 0.5 ％酚酞的 50 ％乙醇溶液 (4) 400 ml 中性甲醛溶液 在 50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入 1ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用 0.02mol/L 的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中