氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得 五种蛋白质测定方法比较如下 去 灵敏度 时间原理 干扰物质说明 凯氏定氮法灵敏度低,费时将蛋白氮转化非蛋白氮用于标准蛋白 ( Kjedahl适用于02-8~10为氨,用酸吸(可用三氯质含量的准确 0mg氮,小时收后滴定 乙酸沉淀蛋测定:干扰少 误差为 白质而分费时太长 双缩脲法灵敏度低中速多肽键+碱性硫酸铵:用于快速测 ( Biuret法)1~20mg20-30cu2+→紫色络Tris缓冲液:定,但不太灵 分钟合物 某些氨基酸敏;不同蛋白 质显色相似 紫外吸收法|较为灵敏快速蛋白质中的酪各种嘌吟和用于层析柱流 50~100g5~10氨酸和色氨酸嘧啶 出液的检测 分钟残基在280mm各种核苷酸核酸的吸收可 处的光吸收 以校正 Folin-酚试灵敏度高慢速双缩脲反应:硫酸铵 耗费时间长 剂法(Lowy|~5ug 40~磷钼酸一磷钨Tris缓冲液:操作要严格计 酸试剂被Tr甘氨酸 分钟和Pe还原各种硫醇颜色深浅随不 同蛋白质变化 考马斯亮蓝灵敏度最高快速考马斯亮蓝染强碱性缓冲最好的方法 法( Bradford1~ug 5~15料与蛋白质结液 干扰物质少 分钟合时,其入mT210色稳定 颜色深浅随不 由465m变为sDs 同蛋白质变化171 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以 6．25 即得。 五种蛋白质测定方法比较如下： 方法 灵敏度 时间 原理 干扰物质 说明 凯氏定氮法 （ Kjedahl 法） 灵敏度低， 适用于 0.2~ 1.0mg 氮， 误差为 2％ 费时 8 ～ 10 小时 将蛋白氮转化 为氨，用酸吸 收后滴定 非蛋白氮 （可用三氯 乙酸沉淀蛋 白质而分 离） 用于标准蛋白 质含量的准确 测定；干扰少； 费时太长 双缩脲法 （Biuret 法） 灵敏度低 1～20mg 中速 20~30 分钟 多肽键＋碱性 Cu2 ＋→紫色络 合物 硫酸铵； Tris 缓冲液； 某些氨基酸 用 于快速测 定，但不太灵 敏；不同蛋白 质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50～100g 快速 5 ～ 10 分钟 蛋白质中的酪 氨酸和色氨酸 残基在 280nm 处的光吸收 各种嘌吟和 嘧啶； 各种核苷酸 用于层析柱流 出液的检测； 核酸的吸收可 以校正 Folin－酚试 剂法（Lowry 法） 灵敏度高 ～5g 慢速 40 ～ 60 分钟 双缩脲反应； 磷钼酸－磷钨 酸试剂被 Tyr 和 Phe 还原 硫酸铵； Tris 缓冲液； 甘氨酸； 各种硫醇 耗费时间长； 操作要严格计 时； 颜色深浅随不 同蛋白质变化 考马斯亮蓝 法 (Bradford 法) 灵敏度最高 1～5g 快速 5 ～ 15 分钟 考马斯亮蓝染 料与蛋白质结 合时，其max 由 465nm 变为 595nm 强碱性缓冲 液； TritonX-100 ; SDS 最好的方法； 干扰物质少； 颜色稳定； 颜色深浅随不 同蛋白质变化