本科分子生物学试卷(五) 4、氨基酰tRNA合成酶是高度专一性,既能高度特异性识别AA,又能高度特异性识别相应,这两 点是保证翻译准确进行的基本条件之一 5.氨基酰APE复合体:作为中间产物,利于酶分别对A和tRNA两种底物特异辨认,如有错配, 合成酶有校正活性,水解磷酸酯键,与正确底物结合。 2.图示大肠杆菌复制叉的结构并标明各组分名称(10′) 答案要点:有:DNA解旋酶、DNA旋转酶、DNA单链结合蛋白、RNA引物、DNA连接酶、DNA 聚合酶、其它成分。图略 五论述题(两题,共26′) 1.比较原核生物与真核生物基因组结构的异同,并指出真核生物细胞的RNA内含子剪接的主要方 式(12′) 答案要点:主要从重复序列情况,有无内含子外显子方面论述,剪接的主要方式指GU-AG和AU-AC 类内含子的间接以及I、Ⅱ1类内含子的间接方式。 2.比较原核生物与真核生物基因表达调控的异同点。(14′) 答案要点:共同点是两者主要是在转录水平进行调控:不同点是原核生物转录与翻译偶联,以操纵 子调控的现象普遍;真核生物基因表达复杂,转录和翻译是分开的,转录后从细胞核进入细胞质, 调控因此也比较复杂,在DNA水平、转录水平和翻译水平均存在。 六、实验题(10′)(任选一题,全作该题不得分) 1.简述PCR原理 答案要点:PCR是在体外扩增DNA序列的方法,原理并不复杂,首先将双链DNA分子在临近沸 点的温度下加热分离成两条单链DNA分子,DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物 中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。包括:DNA解链(变性)、引物与模板DNA 结合(退火)DNA合成(延伸)三步,可以被不断重复 2.设计一个实验证明DNA的复制是半保留复制 答案要点:先将大肠杆菌放在NH4Cl培养基中生长多代,使几乎所有的DNA都被1N标记后, 再将细菌移到只含有NHC1的培养基中培养。随后,在不同的时间取出样品,用十二烷硫酸钠(SDS) 裂解细胞后,将裂解液放在CsC1溶液中进行密度梯度离心(14000,20小时)。离心结束后,从 管底到管口,溶液密度分布从高到低形成密度梯度。DNA分子就停留在与其相当的CSCl密度处, 在紫外光下可以看到形成的区带。N-DNA分子密度较轻(17g/cm3),停留在离管口这较近的位 置;15N-DNA密度较大停留在较低的位置上。当含有H5N-DNA的细胞在14NH4C1培养液中培养一 代后,只有一条区带介于4N-DNA与15N-DNA之间,这时在15N-DNA区已没有吸收带,说明 这时的DNA一条链来自1N-DNA,另一条链为新合成的含有1N的新链。培养两代后则在1N DNA区又出现一条带。在HNH4C1中培养的时间愈久,HN-DNA区带愈强,而14N.5NDNA区带 逐渐减弱,但始终未出现其他新的区带。按照半保留复制方式培养两代,只能出现N-5NDNA 两种分子,而且随着代数的增加4N-DNA逐渐增加。 第3页共3页本科分子生物学试卷（五） 第 ３ 页 共 3 页 4、 氨基酰 tRNA 合成酶是高度专一性，既能高度特异性识别 AA，又能高度特异性识别相应，这两 点是保证翻译准确进行的基本条件之一。 5.氨基酰 AMP-E 复合体：作为中间产物，利于酶分别对 AA 和 tRNA 两种底物特异辨认，如有错配， 合成酶有校正活性，水解磷酸酯键，与正确底物结合。 2. 图示大肠杆菌复制叉的结构并标明各组分名称（10′） 答案要点：有：DNA 解旋酶、DNA 旋转酶、DNA 单链结合蛋白、RNA 引物、DNA 连接酶、DNA 聚合酶、其它成分。图略。 五 论述题（两题，共 26′） 1. 比较原核生物与真核生物基因组结构的异同，并指出真核生物细胞的 RNA 内含子剪接的主要方 式（12′）。 答案要点：主要从重复序列情况，有无内含子外显子方面论述，剪接的主要方式指GU-AG和 AU-AC 类内含子的间接以及 I、II 类内含子的间接方式。 2. 比较原核生物与真核生物基因表达调控的异同点。（14′） 答案要点：共同点是两者主要是在转录水平进行调控；不同点是原核生物转录与翻译偶联，以操纵 子调控的现象普遍；真核生物基因表达复杂，转录和翻译是分开的，转录后从细胞核进入细胞质， 调控因此也比较复杂，在 DNA 水平、转录水平和翻译水平均存在。 六、实验题（10′）（任选一题，全作该题不得分） 1. 简述 PCR 原理。 答案要点：PCR 是在体外扩增 DNA 序列的方法，原理并不复杂，首先将双链 DNA 分子在临近沸 点的温度下加热分离成两条单链 DNA 分子，DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板并利用反应混合物 中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的 DNA 互补链。包括：DNA 解链（变性）、引物与模板 DNA 结合（退火）DNA 合成（延伸）三步，可以被不断重复。 2. 设计一个实验证明 DNA 的复制是半保留复制。 答案要点：先将大肠杆菌放在 15NH4C1 培养基中生长多代，使几乎所有的 DNA 都被 15N 标记后， 再将细菌移到只含有 14NH4C1 的培养基中培养。随后，在不同的时间取出样品，用十二烷硫酸钠(SDS) 裂解细胞后，将裂解液放在 CsC1 溶液中进行密度梯度离心(140000g，20 小时)。离心结束后，从 管底到管口，溶液密度分布从高到低形成密度梯度。DNA 分子就停留在与其相当的 CsC1 密度处， 在紫外光下可以看到形成的区带。14N - DNA 分子密度较轻(1.7g / cm3 )，停留在离管口这较近的位 置; 15N - DNA 密度较大停留在较低的位置上。当含有 15N-DNA 的细胞在 14NH4C1 培养液中培养一 代后，只有一条区带介于 14N - DNA 与 15N - DNA 之间，这时在 15N-DNA 区已没有吸收带，说明 这时的 DNA 一条链来自 15N - DNA，另一条链为新合成的含有 14N 的新链。培养两代后则在 14N - DNA 区又出现一条带。在 14NH4C1 中培养的时间愈久，14N -DNA 区带愈强，而 14N - 15N DNA 区带 逐渐减弱，但始终未出现其他新的区带。按照半保留复制方式培养两代，只能出现 14N - 15N DNA 两种分子，而且随着代数的增加 14N -DNA 逐渐增加