用是暂时切断一条 DNA 链，形成酶-DNA 共价中间物而使超螺旋 DNA 松弛化，然后再将切断的单链 DNA 连接起来，而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的 DNA 旋转酶(DNAgyrase)则的典型的拓扑异构酶Ⅱ， 能将负超螺旋引入 DNA 分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链 DNA，同时需要 ATP 水解为 ADP 以 供能。 3.基因表达 答案要点：遗传信息从 DNA 到 RNA 再到蛋白质的过程。 4.前导肽 答案要点：分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现，它包括起始密码子 AUG 和终止密码子 UGA；如果翻译 起始于 AUG，应该产生一个 14 个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽（实际上还没有观察到）。 5.启动子 答案要点：启动子是 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表 达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。 6. DNA 分子克隆技术 答案要点：（也称基因克隆技术） 在体外将 DNA 分子片段与载体 DNA 片段连接，转入细胞获得大量拷贝 的过程中 DNA 分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切 酶切割和连接，制成 DNA 重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我 复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的 DNA 分子片段。主要目的是获得某一基因或 NDA 片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引 入的 DNA 片段不同，有两种 DNA 库，一种是基因组文库（genomic library）,另一种是 cDNA 库。 7.G 蛋白 答案要点：受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。位于 受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多，都属于结构和功能极为类似的一个家 族，由于它们都能结合并水解 GTP，所以通常称 G 蛋白，即鸟苷酸调节蛋白（guanine nucleotide regulatory protein）。 8.受体型酪氨酸激酶 答案要点：蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，他们通过从 三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化. 目前，已发现 PTK 有 100 多个家族成 员，他们通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导入细胞核内，引起某些基因表达 水平的改变，使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节. 因此在调节细胞的分化、生长和激活中起 到重要作用.根据 PTK 的结构，可分为受体型和非受体型 PTK 两大类，前者又称跨膜 PTK，后者又称细胞 内 PTK. 生长因子受体 PTK(受体型酪氨酸激酶或 RTK): 这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白，其胞外部分 为配体结合区，中间有跨膜区，胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域. 根据他们的结构不同可分为， 表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生 长因子受体(FGFR)家族. 四、论述题（每题 10 分，共 30 分） 1. DNA 与蛋白质相互作用研究方法及其原理？ 答案要点：1、凝胶阻滞实验； 2、DNaseI 足迹实验。 原理参见朱玉贤高教（二）版《现代分子生物学》教材 166~170 页。 2.试述真核生物基因表达调控的一般规律? 答案要点：分为两大类：（一）瞬时调控或称可逆调控，它相当于原核细胞对环境条件作出的反应，包括 某种底物或激素水平升降时，或细胞不同阶段中酶活性的调节；（二）发育调控或称不可逆调控，是真核 基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。根据基因调控在同一事件中发生 的先后次序，又可将其分为转录水平、转录后水平调控。后者又进一步分为 RNA 加工成熟过程调控、翻 译水平调控和蛋白质加工水平的调控。 3.细胞内第二信使包括哪些物质?有何作用?用是暂时切断一条 DNA 链，形成酶-DNA 共价中间物而使超螺旋 DNA 松弛化，然后再将切断的单链 DNA 连接起来，而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的 DNA 旋转酶(DNAgyrase)则的典型的拓扑异构酶Ⅱ， 能将负超螺旋引入 DNA 分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链 DNA，同时需要 ATP 水解为 ADP 以 供能。 3.基因表达 答案要点：遗传信息从 DNA 到 RNA 再到蛋白质的过程。 4.前导肽 答案要点：分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现，它包括起始密码子 AUG 和终止密码子 UGA；如果翻译 起始于 AUG，应该产生一个 14 个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽（实际上还没有观察到）。 5.启动子 答案要点：启动子是 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表 达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。 6. DNA 分子克隆技术 答案要点：（也称基因克隆技术） 在体外将 DNA 分子片段与载体 DNA 片段连接，转入细胞获得大量拷贝 的过程中 DNA 分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切 酶切割和连接，制成 DNA 重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我 复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的 DNA 分子片段。主要目的是获得某一基因或 NDA 片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引 入的 DNA 片段不同，有两种 DNA 库，一种是基因组文库（genomic library）,另一种是 cDNA 库。 7.G 蛋白 答案要点：受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。位于 受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多，都属于结构和功能极为类似的一个家 族，由于它们都能结合并水解 GTP，所以通常称 G 蛋白，即鸟苷酸调节蛋白（guanine nucleotide regulatory protein）。 8.受体型酪氨酸激酶 答案要点：蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，他们通过从 三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化. 目前，已发现 PTK 有 100 多个家族成 员，他们通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导入细胞核内，引起某些基因表达 水平的改变，使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节. 因此在调节细胞的分化、生长和激活中起 到重要作用.根据 PTK 的结构，可分为受体型和非受体型 PTK 两大类，前者又称跨膜 PTK，后者又称细胞 内 PTK. 生长因子受体 PTK(受体型酪氨酸激酶或 RTK): 这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白，其胞外部分 为配体结合区，中间有跨膜区，胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域. 根据他们的结构不同可分为， 表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生 长因子受体(FGFR)家族. 四、论述题（每题 10 分，共 30 分） 1. DNA 与蛋白质相互作用研究方法及其原理？ 答案要点：1、凝胶阻滞实验； 2、DNaseI 足迹实验。 原理参见朱玉贤高教（二）版《现代分子生物学》教材 166~170 页。 2.试述真核生物基因表达调控的一般规律? 答案要点：分为两大类：（一）瞬时调控或称可逆调控，它相当于原核细胞对环境条件作出的反应，包括 某种底物或激素水平升降时，或细胞不同阶段中酶活性的调节；（二）发育调控或称不可逆调控，是真核 基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。根据基因调控在同一事件中发生 的先后次序，又可将其分为转录水平、转录后水平调控。后者又进一步分为 RNA 加工成熟过程调控、翻 译水平调控和蛋白质加工水平的调控。 3.细胞内第二信使包括哪些物质?有何作用?