物品准备: 1.培养液、 TRIZOL 2.细胞培养瓶、病毒收集瓶、15ml离心管 3.废物缸、废液缸、废物盒 实验步骤 1.将带入的H9细胞,废物缸、废液瓶、废物盒、离心管、 Trizol试剂等实验必需品按 相对污染与清洁区依次放置。 2.分别将已接种HIV的鸱细胞从培养箱内取出,编号 置显微镜下观察,记录见下。 3.在安全柜正中靠操作者处铺上吸水垫,喷上75%酒精 4.吸出已接种HⅣV的H细胞悬液,编号 移入15ml离心管 5.将离心管在安全柜内放入离心杯中,喷消毒液,更换手套,带出离心 转/分钟,离心 分钟。 7.将离心杯带入安全柜内,取出离心管。离心杯喷洒消毒剂后取出 8.分别将上清以每个 wendorf管0.5ml分装,标记保种,共」 管,标 记 放入密封盒,记录见附表 9.分别吸取 ml病毒上清至带入的未接种细胞培养瓶内,轻摇培养瓶混合, 使病毒上清充分接触细胞。细胞培养瓶外表面喷洒消毒剂后,拿出安全柜后放入培养 箱。标记 10.将剩余上清 ,注意不要将沉淀细胞悬起 11.吸取 微升 Trizol加入细胞沉淀,混匀后吸出,移入1.5ml离心管,标 记 放入密封盒,外表面喷洒消毒剂后,拿出安全柜。 12.将吸水垫收起放入废物盒,双手喷上消毒剂,脱去外层手套,重戴干净手套。 13.将安全柜内物品喷洒消毒剂后取出,取出顺序为干净的物品先取出,废弃物收集盒最 后取出。最后将安全柜台面喷洒消毒剂后,从干净区域到污染区域的顺序擦拭清洁 脱去外层手套带出 14.换上干净外层手套,关上安全柜窗口,打开紫外,定时15分钟 实验结果 实验意外情况及处理物品准备： 1. 培养液、TRIZOL 2. 细胞培养瓶、病毒收集瓶、15ml 离心管 3. 废物缸、废液缸、废物盒 实验步骤： 1. 将带入的 H9 细胞，废物缸、废液瓶、废物盒、离心管、Trizol 试剂等实验必需品按 相对污染与清洁区依次放置。 2. 分别将已接种 HIV 的 H9 细胞从培养箱内取出，编号 ， 置显微镜下观察，记录见下。 3. 在安全柜正中靠操作者处铺上吸水垫，喷上 75%酒精。 4. 吸出已接种 HIV 的 H9 细胞悬液，编号 ，移入 15ml 离心管。 5. 将离心管在安全柜内放入离心杯中，喷消毒液，更换手套，带出离心。 6. 转/分钟，离心 分钟。 7. 将离心杯带入安全柜内，取出离心管。离心杯喷洒消毒剂后取出。 8. 分别将上清以每个 ependorf 管 0.5ml 分装，标记保种，共 管，标 记 。放入密封盒，记录见附表。 9. 分别吸取 ml 病毒上清至带入的未接种 H9 细胞培养瓶内，轻摇培养瓶混合， 使病毒上清充分接触细胞。细胞培养瓶外表面喷洒消毒剂后，拿出安全柜后放入培养 箱。标记 。 10. 将剩余上清 ，注意不要将沉淀细胞悬起。 11. 吸取 微升 Trizol 加入细胞沉淀，混匀后吸出，移入 1.5ml 离心管，标 记 ，放入密封盒，外表面喷洒消毒剂后，拿出安全柜。 12. 将吸水垫收起放入废物盒，双手喷上消毒剂，脱去外层手套，重戴干净手套。 13. 将安全柜内物品喷洒消毒剂后取出，取出顺序为干净的物品先取出，废弃物收集盒最 后取出。最后将安全柜台面喷洒消毒剂后，从干净区域到污染区域的顺序擦拭清洁。 脱去外层手套带出。 14. 换上干净外层手套，关上安全柜窗口，打开紫外，定时 15 分钟。 实验结果： 实验意外情况及处理：