此离心法的关键是选择合适的离心转速和时间 (2)等密度区带离心法:离心管中预先放置好梯度介质,样品加在梯度液面 上,或样品预先与梯度介质溶液混合后装入离心管,通过离心形成梯度,这就是预形 成梯度和离心形成梯度的等密度区带离心产生梯度的二种方式 离心时,样品的不同颗粒向上浮起,一直移动到与它们的密度相等的等密度点 的特定梯度位置上,形成几条不同的区带,这就是等密度离心法。体系到达平衡状态 后,再延长离心时间和提高转速已无意义,处于等密度点上的样品颗粒的区带形状和 位置均不再受离心时间所影响,提高转速可以缩短达到平衡的时间,离心所需时间以 最小颗粒到达等密度点(即平衡点)的时间为基准,有时长达数日。 等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效 果越好,与颗粒大小和形状无关,但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带 宽度。 等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝CsCl,其密度可达1.7g/cm3。 此法可分离核酸、亚细胞器等,也可以分离复合蛋白质,但简单蛋白质不适用。 收集区带的方法有许多种,例如: (1)用注射器和滴管由离心管上部吸出。 (2)有针刺穿离心管底部滴出。 (3)用针刺穿离心管区带部份的管壁,把样品区带抽出 (4)用一根细管插入离心管底,泵入超过梯度介质最大密度的取代液,将样品 和梯度介质压出,用自动部分收集器收集。 5.4离心操作的注意事项 高速与超速离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备,因其转速高,产 生的离心力大,使用不当或缺乏定期的检修和保养,都可能发生严重事故,因此使用 离心机时都必须严格遵守操作规程 1.使用各种离心机时,必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物,平衡 时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围,每个离心机不同的转头有各 自的允许差值,转头中绝对不能装载单数的管子,当转头只是部分装载时,管子必须 互相对称地放在转头中,以便使负载均匀地分布在转头的周围。 2.装载溶液时,要根据各种离心机的具体操作说明进行,根据待离心液体的性 质及体积选用适合的离心管,有的离心管无盖,液体不得装得过多,以防离心时甩126 此离心法的关键是选择合适的离心转速和时间 （2）等密度区带离心法：离心管中预先放置好梯度介质，样品加在梯度液面 上，或样品预先与梯度介质溶液混合后装入离心管，通过离心形成梯度，这就是预形 成梯度和离心形成梯度的等密度区带离心产生梯度的二种方式。 离心时，样品的不同颗粒向上浮起，一直移动到与它们的密度相等的等密度点 的特定梯度位置上，形成几条不同的区带，这就是等密度离心法。体系到达平衡状态 后，再延长离心时间和提高转速已无意义，处于等密度点上的样品颗粒的区带形状和 位置均不再受离心时间所影响，提高转速可以缩短达到平衡的时间，离心所需时间以 最小颗粒到达等密度点（即平衡点）的时间为基准，有时长达数日。 等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效 果越好，与颗粒大小和形状无关，但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带 宽度。 等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝 CSCl，其密度可达 1.7 g/cm3。 此法可分离核酸、亚细胞器等，也可以分离复合蛋白质，但简单蛋白质不适用。 收集区带的方法有许多种，例如： （1） 用注射器和滴管由离心管上部吸出。 （2） 有针刺穿离心管底部滴出。 （3） 用针刺穿离心管区带部份的管壁，把样品区带抽出。 （4）用一根细管插入离心管底，泵入超过梯度介质最大密度的取代液，将样品 和梯度介质压出，用自动部分收集器收集。 5.4 离心操作的注意事项： 高速与超速离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备，因其转速高，产 生的离心力大，使用不当或缺乏定期的检修和保养，都可能发生严重事故，因此使用 离心机时都必须严格遵守操作规程。 1. 使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡 时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各 自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须 互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。 2. 装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性 质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩