454 Solexa SOLiD 仪器 (Roch GS FLX sequencer) (Illumina Genome Analyzer) (ABI SOLiD sequencer) 公司 罗氏 Illumina ABI 4种荧光标记寡核苷酸的 测序原理 焦磷酸测序 可逆终正化学反应 连接反应测序 待测DNA样品祓打断成300-80Obp DNA片段加上接头之后，可以随机 的片段后，3'和5端分别加上接 测序之前，DNA模板通过乳化 的附着于玻璃表面(ow cel),并 头，与DNA片段结合到微珠上。测 PCR扩增，和Roche454的基本相 且在固相的表面经过桥式扩增。这 序PCR反应发生在固相微珠上，且 同，只是Solid的微珠更小，只有1 样就形成了数千份相同的单分子 整个PCR反应和相关的酶被油包水 um。3端修饰的微珠可以沉淀在玻 簇，被用做测序模板。测序采取边 测序原理 的液滴包裹，每个油滴系统只包含1 片上。连接测序所用的底物是8个 合成边测序的方法，和模板配对的 详细 个DNA模板。扩增后，每个DNA 碱基荧光探针混合物，根据序列的 ddNTP原料被添加上去，不配对的 分子可以得到富集，每个微珠只能 位置，样品DNA就可以被探针标 ddNTP原料被洗去，成像系统能够 形成一个克隆集落并依此通过测序 记。DNA连接酶优先连接和模板 捕捉荧光标记的核苷酸。随着DNA 通道。测序过程中，GS门X系统会 配对的探针，并引发该位点的荧光 3端的阻断剂的去除，下一轮的延伸 将引物上dNTP的聚合与荧光信号 信号的产生。 就可以进行。 释放偶联起来。 每次DNA仅延伸一个核苷酸 读长只有50-75bp 特点 读长中等，价格适中 读长在100-150bp之间 精确度可达Q40 de novo测序、转录组测序 小RNA鉴定 适用范国 基因组重测序和SNP检测等 宏基因组研究等 甲基化和表观遗传学研究等