1.寡核苷酸片段的化学合成的方法 2.化学方法合成的DNA片段 第六节DNA片段大小的凝胶电泳检测 1.琼脂糖凝胶电泳参数 2.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳参数 3.脉冲场凝胶电泳参数 4.DNA片段的连接重组 5.DNA连接酶 6.DNA片段之间的连接 7.DNA重组类型 (三)教学要求 1.了解DNA的组成及结构 2.理解DNA的浓缩及纯化 3.掌握大肠杆菌质粒DNA的提取以及λ噬菌体DNA的提取。 4.理解限制性核酸内切酶的特异性及作用机制。 5.聚合酶链式反应技术的原理及其应用。 6.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及方法 7.掌握限制性内切酶的反应系统。 8.掌握E. colinA连接酶和T4DMA连接酶的连接机理。 9.了解DNA的重组类型 (四)重点、难点及教学建议 重点:天然DNA的提取,限制性核酸内切酶和连接酶的作用机理及方法,PCR扩增DNA片 段的基本原理和方法,琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法。 难点:DNA的纯化与浓缩,DNA片段的化学合成,DNA片段的连接。 教学建议: 1.对有关DNA重组内容涉及到的概念作进一步的复习,重点在讲清楚DNA重组的内在机制 2.PR扩增DNA片段、限制性核酸内切酶、连接酶、琼脂糖凝胶电泳等相关实验技术作全面 掌握。 第三章基因克隆的载体 (一)教学目的3 1.寡核苷酸片段的化学合成的方法 2.化学方法合成的 DNA 片段 第六节 DNA 片段大小的凝胶电泳检测 1.琼脂糖凝胶电泳参数 2.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳参数 3.脉冲场凝胶电泳参数 4.DNA 片段的连接重组 5.DNA 连接酶 6.DNA 片段之间的连接 7.DNA 重组类型 （三）教学要求 1.了解 DNA 的组成及结构 2.理解 DNA 的浓缩及纯化 3.掌握大肠杆菌质粒 DNA 的提取以及 λ 噬菌体 DNA 的提取。 4.理解限制性核酸内切酶的特异性及作用机制。 5.聚合酶链式反应技术的原理及其应用。 6.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及方法 7.掌握限制性内切酶的反应系统。 8.掌握 E.coliDNA 连接酶和 T4DNA 连接酶的连接机理。 9.了解 DNA 的重组类型。 （四）重点、难点及教学建议 重点： 天然 DNA 的提取，限制性核酸内切酶和连接酶的作用机理及方法， PCR 扩增 DNA 片 段的基本原理和方法，琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法。 难点： DNA 的纯化与浓缩，DNA 片段的化学合成，DNA 片段的连接。 教学建议： 1.对有关 DNA 重组内容涉及到的概念作进一步的复习，重点在讲清楚 DNA 重组的内在机制。 2.PCR 扩增 DNA 片段、限制性核酸内切酶、连接酶、琼脂糖凝胶电泳等相关实验技术作全面 掌握。 第三章 基因克隆的载体 （一）教学目的