实验(二)沉淀反应定量法 实验目的:测定抗血清中特异性抗体的浓度。 二.器材与试剂: 1.37℃恒温箱 2.紫外分光光度计 3.冰箱 4.塑料离心管(15ml) 5.抗原(小牛血清) 6.免疫血清 7.pH7.2磷酸缓冲生理盐水(PBS) 8.0.1M NaOH 9.高速离心机 实验方法 在10支塑料离心管里分别加入1,10,20,50,100,150,250,350,450μl的抗原溶 液,用PBS将每支离心管里的溶液总量加至450μu。然后分别向各支离心管里再加入10oul 的抗血清,充分混合后在37℃的恒温箱内保温一小时,再在4℃的冰箱内放一夜。通过离心 (1000pm,20分钟)将沉淀和上清分开。将沉淀用冰冷的缓冲液洗涤三次后加入1ml0.M NaOH使之溶解,然后用紫外分光光度计测定A28nm处的光吸收 四数据处理 以抗体和牛血清白蛋白在A28=1.0时浓度分别为0695和1.886mg/ml计算,作出以抗 原量为Ⅹ轴,沉淀的总蛋白量为Y轴的沉淀曲线图。通过从图中最高值中减去抗原的量计 算出抗血清中特异的抗体的含量269 实验(二) 沉淀反应定量法 一．实验目的：测定抗血清中特异性抗体的浓度。 二．器材与试剂: 1．37℃恒温箱 2．紫外分光光度计 3．冰箱 4．塑料离心管（15ml） 5．抗原（小牛血清） 6．免疫血清 7．pH 7.2 磷酸缓冲生理盐水（PBS） 8．0.1M NaOH 9．高速离心机 三．实验方法 在 10 支塑料离心管里分别加入 1，10，20，50，100，150，250，350，450l 的抗原溶 液，用 PBS 将每支离心管里的溶液总量加至 450l 。然后分别向各支离心管里再加入 100l 的抗血清，充分混合后在 37℃的恒温箱内保温一小时，再在 4℃的冰箱内放一夜。通过离心 （10000rpm，20 分钟）将沉淀和上清分开。将沉淀用冰冷的缓冲液洗涤三次后加入 1ml 0.1M NaOH 使之溶解，然后用紫外分光光度计测定 A280nm 处的光吸收。 四.数据处理 以抗体和牛血清白蛋白在 A280=1.0 时浓度分别为 0.695 和 1.886mg/ml 计算，作出以抗 原量为 X 轴，沉淀的总蛋白量为 Y 轴的沉淀曲线图。通过从图中最高值中减去抗原的量,计 算出抗血清中特异的抗体的含量