附外源DNA需特定的时期：其次精子吸附DNA时精子活性及DNA性质都受影响。 利用精子作为基因转移的工具，在实践中存在许多问题，但此技术至少在构思上， 对于大动物转基因研究具重要意义。 (三)胚胎干细胞(ES)介导法 胚胎干细胞(embryonic stem cel)是从胚泡中将 举翻感餐 内细胞团取出在体外培养建立的，在培养时保持了它 的正常核型。胚胎干细胞注入寄主胚泡后，参与胚胎 。o 形成，进入嵌合体动物的生殖系统。用DNA转染法 或反转录病毒介导法可将基因导入胚胎干细胞，选出 带有目的基因的细胞克隆，然后导入受体胚胎（图 15-3)。然而由此法生成的后代都是嵌合体，若由这 移植到导体子雪 些嵌合体胚胎中再分离出干细胞，用核移植技术将其 ov 细胞核植入无核卵细胞，这样可以提高转基因的效围12-3E6细胞介导的转基因动物生产 旁 (四)染色体片段显微注入法 染色体介导法是指从人或动物染色体上割取特定的染色体片段M期)或分离出来之 后，以其为媒介将外源基因注入动物早期胚胎中，以获得外源DNA的动物，严格地讲 称为转染色体动物。通常人们采用离心分离法或流式细胞仪(ow cytometry)分离法分离染 色体 尽管目前该技术应用因难较大，且成功率很低(0~0.002%)，但由于它具有不需经基 因重组就可转移超大型外源DNA(大于100Okb)之独特优点，适于多基因转移。鉴于本法 导入的遗传信总片段长，能生产出具备某些特殊疾病的实验动物模型。 四、转基因动物检测的方法 以转基因鼠为例，说明转基因动物检测的方法。经转基因步骤获得的仔鼠出生后采 样提取DNA。将制备好的DNA样品点到尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再用所注射的基因 作成探针，作斑点杂交，检测出带有外源基因的小鼠。然后采集血样或外源基因表达的 器官组织用以制备RNA:用外源基因作为探针与制备的RNA进行Northern分子杂交， 检查外源基因是香转录成mRNA。接着对带外源基因的小鼠进行放射免疫测定，以检测 由外源基因合成的蛋白质。可用原位杂交法测出外源基因在染色体上的整合部位，还可 将带外源基因的小鼠进行繁殖，检查基因是否进入生殖系统，以及在后代中的传递情况。 对其它动物除了收集受精卵的方式，注射外源基因和胚胎移植不同之外，其余的检测方 法都是相同的