(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便 2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR I只能识别序列-GAAT 只能在G和A之间切制。若在某目的基因的两侧各有1个EoRI的切点，请画出目的基因 两侧被限制酶EcoR「切割后所形成的黏性末瑞。 (3)pBR322分子中另有单个的BamH I限制酶作用位点，现将经BamH I处理后的质粒与 用另一种限制酶BgⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复」 健，成功 获得了重组质粒，说 明 (4为了检测(3)中重组质粒是否导入原本无 1m 「和Te的大肠杆菌，将大肠杆菌在含 苄青素的培养基上 培养得到如图 所示的 再将灭菌绒布按到培养基上 使绒布面 上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三所示的结果（空圈表示与图二 对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现 为 一图三结果显示，多数大肠杆菌导入的 15.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入Amp或Ter中会导致相应的基因失活(Amp 表示氨苄青霉素抗性基因，Ter表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后 与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直 接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化了。被转化的大肠杆菌有三种，分别 是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下 列问顺 复制原。 (1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有」 (答出两点即可)。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的 和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因 并日 动 的细胞也是不能区分的，其原因是。 在 上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆茵菌落，还需使用含有 的培养基。 (3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料米 ■☐☐参考答案 自主预习 (1)构建人工质粒时要有抗性基因,以便 于 。 (2)pBR322 分子中有单个 EcoRⅠ限制酶作用位点,EcoRⅠ只能识别序列-GAATTC-,并且 只能在 G 和 A 之间切割。若在某目的基因的两侧各有 1 个 EcoRⅠ的切点,请画出目的基因 两侧被限制酶 EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。 (3)pBR322 分子中另有单个的 BamHⅠ限制酶作用位点,现将经 BamHⅠ处理后的质粒与 用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因,通过DNA连接酶作用恢复 键,成功 获得了重组质粒,说 明 。 (4)为了检测(3)中重组质粒是否导入原本无 Ampr和 Tetr的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨 苄青霉素的培养基上培养,得到如图二所示的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾 上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三所示的结果(空圈表示与图二 对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现 为 ,图三结果显示,多数大肠杆菌导入的 是 。 15.某一质粒载体如图所示,外源 DNA 插入 Ampr或 Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr 表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用 BamHⅠ酶切后, 与用 BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入 DNA 连接酶进行连接反应,用得到的混合物直 接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化了。被转化的大肠杆菌有三种,分别 是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下 列问题: (1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有 (答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的 和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因 是 ;并且 和 的细胞也是不能区分的,其原因是 。在 上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌菌落,还需使用含有 的培养基。 (3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其 DNA 复制所需的原料来 自 。 参考答案 自主预习