阳性结果：扁桃体隐窝上皮细胞或肾曲小管上皮细胞的胞浆内呈明亮的翠绿色荧光，细胞形态 清晰 阴性结果：五荧光或荧光微弱，细胞形态不清晰。 [思考题] 1.荧光抗体染色法的原理是什么？ 2.荧光抗体技术有何优点？ 实验五酶联免疫吸附试验(ELISA) 酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)是目前发展最快，应用最广 泛的一种免疫学检测技术。其基本过程是将抗原或抗体吸附于固相载体上，在载体上进行免疫酶染 色，底物显色后以肉眼或酶标仪检测结果。通过酶与底物作用呈现颜色的深度，进行定量或定性分 析。本试验将抗原抗体反应的特异性与酶的高催化活性相结合，使测定方法达到很高的敏感性，且 特异性强，可用于生物活性物质的微量检测及疾病诊断，广泛应用于整个生命科学领域。 [目的要求] 1.掌握酶联免疫吸附试验的原理及基本操作方法。 2.了解猪群猪瘟抗体监测的意义。 [材料与试剂] 1.酶标板，酶联检测仪（酶标仪），微量加样器，谪头(ti头)。 2.0.01mol/LPBS(pH7.2),0.01mo1/L PBST(含0.01%土温20)，2mo1/LH2S04,pH9.6 碳酸盐缓冲液（包被液），封闭液，邻苯二胺(OPD),3%202,柠檬酸盐缓冲液。 3。猪瘟病毒抗原，兔抗猪1gG酶标抗体，待检血清，猪瘟阳性血清，猪瘟阴性血清。 [实验内容与操作方法] 间接ELISA(以猪瘟抗体的检测为例，该法可用于猪瘟抗体监测) 1.包被：用碳酸盐缓冲液稀释猪瘟病毒抗原至1μg/ml,以微量加样器每孔加样100μL,置湿盒 内37℃包被2-3h。 2.洗涤：以PBST冲洗酶标板，共洗5次，每次3min。 3.加待检血清：每孔加100 uL PBS,然后在酶标板的第1孔加100uL待检血清，以微量加样器反 复吹吸几次混匀，吸100L加至第2孔，依次倍比稀释至第10孔，剩余的100uL弃去，置湿盒内37℃作 用2h。 4.洗涤：同上。 5.加酶标抗体：以PS将兔抗猪IgG酶标抗体稀释至工作浓度，每孔加100μL,置湿盒内37℃作 用2h。阳性结果：扁桃体隐窝上皮细胞或肾曲小管上皮细胞的胞浆内呈明亮的翠绿色荧光，细胞形态 清晰。 阴性结果：五荧光或荧光微弱，细胞形态不清晰。 [思考题] 1. 荧光抗体染色法的原理是什么? 2. 荧光抗体技术有何优点? 实验五 酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）是目前发展最快，应用最广 泛的一种免疫学检测技术。其基本过程是将抗原或抗体吸附于固相载体上，在载体上进行免疫酶染 色，底物显色后以肉眼或酶标仪检测结果。通过酶与底物作用呈现颜色的深度，进行定量或定性分 析。本试验将抗原抗体反应的特异性与酶的高催化活性相结合，使测定方法达到很高的敏感性，且 特异性强，可用于生物活性物质的微量检测及疾病诊断，广泛应用于整个生命科学领域。 [目的要求] 1. 掌握酶联免疫吸附试验的原理及基本操作方法。 2. 了解猪群猪瘟抗体监测的意义。 [材料与试剂] 1. 酶标板，酶联检测仪（酶标仪），微量加样器，滴头（tip头）。 2. 0.01mol/L PBS（pH7.2）， 0.01mol/L PBST（含0.01%土温20）， 2mol/L H2SO4，pH9.6 碳酸盐缓冲液（包被液），封闭液，邻苯二胺（OPD），3% H2O2，柠檬酸盐缓冲液。 3. 猪瘟病毒抗原，兔抗猪IgG酶标抗体，待检血清，猪瘟阳性血清，猪瘟阴性血清。 [实验内容与操作方法] 间接ELISA（以猪瘟抗体的检测为例，该法可用于猪瘟抗体监测） 1. 包被：用碳酸盐缓冲液稀释猪瘟病毒抗原至1mg/ml，以微量加样器每孔加样100mL，置湿盒 内37℃包被2-3h。 2. 洗涤：以PBST冲洗酶标板，共洗5次，每次3min。 3. 加待检血清：每孔加100mL PBS，然后在酶标板的第1孔加100mL待检血清，以微量加样器反 复吹吸几次混匀，吸100mL加至第2孔，依次倍比稀释至第10孔，剩余的100mL弃去，置湿盒内37℃作 用2h。 4. 洗涤：同上。 5. 加酶标抗体：以PBS将兔抗猪IgG酶标抗体稀释至工作浓度，每孔加100mL，置湿盒内37℃作 用2h