·570 北京科技大学学报 第29卷 此时开始逐步加入造纸废水对活性污泥进行驯 2.3菌种鉴定 化.在利用造纸废水逐步替代营养液对污泥驯化的 培养1d后A、B两菌种在原水滴周围有生长菌 阶段，每个原水比例条件下均做了换水周期为1d 落出现，C菌种没有在原水滴周围生长的情况：培养 和2的两个测试以寻求适合目标微生物的培养条 2d后A、B两菌种在培养皿内都生长，并且均能在 件，结果见表1. 原水周围生长出菌落，C菌种仍没有出现在原水周 表1驯化期间CODr去除率 围的菌落（培养1周后，仍没有出现） Table 1 Removal rate of CODo in the domestication period 实验证实经驯化后的杂菌中含有两种可适应造 CODo去除率/% 纸废水的单一性状菌种，它们都有可能是目标菌种 原水比例/% 白腐菌， 换水周期1d 换水周期2d 经两次连续分离后主要获得两种菌：一种为绿 10 85.5 88.6 色绒粒状菌，初步认为是绿色木霉，镜检为丝状；另 20 80.8 86.5 一种为白色绒状，初步认为是白腐菌，镜检为长 40 76.5 80.4 丝菌 % 79.5 75.7 在培养皿中接种白色绒状菌落，用加入琼脂及 80 69.2 73.2 少量单宁酸的专项培养基培养，温度控制在32℃， 100 70.5 74.0 经2d培养后，在菌落外侧形成了肉眼可见的褐色 轮环，可见接种的白色绒状菌是白腐菌， 在驯化的末期，原水比例提至100%后，测得换 对已鉴别出的目标菌种一白腐菌一进行革 水周期为2d时出水C0Dc,去除率达到了74%，镜 兰氏染色后，在显微镜下观察发现，目标菌种为紫 检瓶内微生物活性良好，轮虫、线虫等后生动物大量 色，根据革兰氏染色原理，可判定该菌种为革兰氏 繁殖，钟虫、累枝虫等固着型纤毛虫虽数量不及培养 阳性菌.菌种的形状为短杆状，见图2和图3. 期间但个体活性较好，以此可间接反映出目标微生 物生长良好，对造纸废水的降解效果明显 2.2菌种分离 菌种分离结果见图1.图中，A种菌落内圈为绿 色绒粒，中圈为绿色与白色混杂，最外圈为乳白色绒 粒；B种菌落大部分为白色茸状，边缘有少量黄绿色 菌生长；C种菌落大部分为淡黄色绒粒状，镜检均有 少量菌丝孢子， 图2普通显微镜下菌种革兰氏染色照片 Fig.2 Microscope photo of Gram-stained bacteria 图1杂菌接种普通培养基3d后照片 Fig-1 Photo of mixed-bacteria inoculation ordinary culture medi- um after 3d 培养5d后，培养基上菌落蔓延至整个培养皿 中.A菌落外圈为白绒状，内圈全变绿；B几乎全为 图3油镜下菌种革兰氏染色照片 白色；C仍为淡黄色绒粒，镜检菌丝不发达 Fig.3 Oil lens photo of Gramstained bacteria此时开始逐步加入造纸废水对活性污泥进行驯 化．在利用造纸废水逐步替代营养液对污泥驯化的 阶段‚每个原水比例条件下均做了换水周期为1d 和2d 的两个测试以寻求适合目标微生物的培养条 件‚结果见表1． 表1 驯化期间 CODcr去除率 Table1 Removal rate of CODCr in the domestication period 原水比例／％ CODCr去除率／％ 换水周期1d 换水周期2d 10 85∙5 88∙6 20 80∙8 86∙5 40 76∙5 80∙4 60 79∙5 75∙7 80 69∙2 73∙2 100 70∙5 74∙0 在驯化的末期‚原水比例提至100％后‚测得换 水周期为2d 时出水 CODCr去除率达到了74％‚镜 检瓶内微生物活性良好‚轮虫、线虫等后生动物大量 繁殖‚钟虫、累枝虫等固着型纤毛虫虽数量不及培养 期间但个体活性较好‚以此可间接反映出目标微生 物生长良好‚对造纸废水的降解效果明显． 2∙2 菌种分离 菌种分离结果见图1．图中‚A 种菌落内圈为绿 色绒粒‚中圈为绿色与白色混杂‚最外圈为乳白色绒 粒；B 种菌落大部分为白色茸状‚边缘有少量黄绿色 菌生长；C 种菌落大部分为淡黄色绒粒状‚镜检均有 少量菌丝孢子． 图1 杂菌接种普通培养基3d 后照片 Fig．1 Photo of mixed-bacteria inoculation ordinary culture medi￾um after3d 培养5d 后‚培养基上菌落蔓延至整个培养皿 中．A 菌落外圈为白绒状‚内圈全变绿；B 几乎全为 白色；C 仍为淡黄色绒粒‚镜检菌丝不发达． 2∙3 菌种鉴定 培养1d 后 A、B 两菌种在原水滴周围有生长菌 落出现‚C 菌种没有在原水滴周围生长的情况；培养 2d 后 A、B 两菌种在培养皿内都生长‚并且均能在 原水周围生长出菌落‚C 菌种仍没有出现在原水周 围的菌落（培养1周后‚仍没有出现）． 实验证实经驯化后的杂菌中含有两种可适应造 纸废水的单一性状菌种‚它们都有可能是目标菌种 －－－白腐菌． 经两次连续分离后主要获得两种菌：一种为绿 色绒粒状菌‚初步认为是绿色木霉‚镜检为丝状；另 一种为白色绒状‚初步认为是白腐菌‚镜检为长 丝菌． 在培养皿中接种白色绒状菌落‚用加入琼脂及 少量单宁酸的专项培养基培养‚温度控制在32℃‚ 经2d 培养后‚在菌落外侧形成了肉眼可见的褐色 轮环‚可见接种的白色绒状菌是白腐菌． 对已鉴别出的目标菌种－－－白腐菌－－－进行革 兰氏染色后‚在显微镜下观察发现‚目标菌种为紫 色．根据革兰氏染色原理‚可判定该菌种为革兰氏 阳性菌．菌种的形状为短杆状．见图2和图3． 图2 普通显微镜下菌种革兰氏染色照片 Fig．2 Microscope photo of Gram-stained bacteria 图3 油镜下菌种革兰氏染色照片 Fig．3 Oil lens photo of Gram-stained bacteria ·570· 北 京 科 技 大 学 学 报 第29卷