3.2等电点沉淀法 ◆利用两性电解质在等电点时溶解度最低,以及不同的两性电解质有不同的等电点这 特性,通过调节溶液的pH值,使酶或杂质沉淀析岀,从而使酶与杂质分离的方法称为等电 ◆由于在等电点时两性电解质分子表面的水化膜仍然存在在实际使用时,等电点沉淀法 往往与其它方法一起使用。 ◆在加酸或加碱调节pH值的过程中,要-边搅拌边慢慢加进,以防止局部过酸或过 碱而引起的酶变性失活。 33有机溶剂沉淀法 ◆利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同,通过添加一定量的某种有机溶剂,使 酶或杂质沉淀析岀,从而使酶与杂质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。 ◆有机溶剂之所以能使酶沉淀析岀是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。 常用于酶的沉淀分离的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇等。有机溶剂的用量一 般为酶液体积的2倍左右,不同的酶和使用不同的有机溶剂时,有机溶剂的使用浓度有所 不同 ◆有机溶剂沉淀法的分离效果受到溶液pH值的影响,一般应将酶液的ρH值调节到欲 分离酶的等电点附近。 34复合沉淀法 ◆在酶液中加入某些物质,使它与酶形成复合物而沉淀下来,从而使酶与杂质分离的方 法称为复合沉淀法 ◆常用的复合沉淀剂有单宁、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物 3.5选择性变性沉淀法8 3.2 等电点沉淀法 ◆利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一 特性，通过调节溶液的 pH 值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的方法称为等电 点沉淀法。 ◆由于在等电点时两性电解质分子表面的水化膜仍然存在,在实际使用时，等电点沉淀法 往往与其它方法一起使用。 ◆在加酸或加碱调节 pH 值的过程中， 要一边搅拌一边慢慢加进，以防止局部过酸或过 碱而引起的酶变性失活。 3.3 有机溶剂沉淀法 ◆利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使 酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离的方法称为有机溶剂沉淀法。 ◆有机溶剂之所以能使酶沉淀析出是由于有机溶剂的存在会使溶液的介电常数降低。 ◆常用于酶的沉淀分离的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇等。有机溶剂的用量一 般为酶液体积的 2 倍左右，不同的酶和使用不同的有机溶剂时，有机溶剂的使用浓度有所 不同。 ◆有机溶剂沉淀法的分离效果受到溶液 pH 值的影响，一般应将酶液的 pH 值调节到欲 分离酶的等电点附近。 3.4 复合沉淀法 ◆在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离的方 法称为复合沉淀法。 ◆常用的复合沉淀剂有单宁、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。 3.5 选择性变性沉淀法