(3)细分级分离: 般用层析法和电泳法。 1.电泳:在外电场作用下,不处于等电状态的带电颗粒(如蛋白质分子) 将向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。 电泳迁移率或泳动度(μ):为单位电场强度下,蛋白质分子在溶液 中的移动速度 υ:颗粒泳动速度,E:电场强度 常用的电泳种类: 区带电泳:在支持物上电泳时,蛋白质混合物被分离成若干区带 ②薄膜电泳:使用醋酸纤维薄膜和聚酰胺薄膜。 ⑧凝胶电泳:凝胶有分子筛效应,可更好分离。如常用的聚丙烯酰胺 凝胶电泳(PAGE) ④毛细管电泳(HPCE):毛细管散热好,有助于消除热引起的对流和 区带变宽;系统髙分辨力,进样量少,可分离手性化合物。 ⑤等电聚焦电泳:具有不同等电点的两性电解质载体在电场中自动形 成pH梯度,使被分离物移动至各自等电点的pH处,聚集成很窄的区带。 分辨率高,适于分离分子量相同而电荷不同的两性分子 pH梯度制作:可利用两性电解质,已有商品出售 2.亲和层析:是利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法,可一步 提纯 根据生物分子与特定固相化配体( Ligand)之间的亲和力不同,而使 生物分子在一种特制的具有专一吸附能力的吸附剂上进行层析 例如将酶的底物或抑制剂接到固体支持物上(如琼脂糖),制成专 吸附剂,并装在层析柱中。当含有这种酶的溶液通过层析柱时,酶就会被 吸附,而其他蛋白质则不被吸附先流出:然后再用适当缓冲液将吸附在柱 上的酶洗脱下来。 (4)结晶: 结晶为蛋白质纯度一个标志,也是判断制品处于天然状态指标。蛋白 质纯,则易结晶,为分离提纯最后步骤。（3） 细分级分离： 一般用层析法和电泳法。 1. 电泳：在外电场作用下，不处于等电状态的带电颗粒（如蛋白质分子） 将向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。 电泳迁移率或泳动度（μ）：为单位电场强度下，蛋白质分子在溶液 中的移动速度。 μ = υ/E υ：颗粒泳动速度，E：电场强度 常用的电泳种类： ① 区带电泳：在支持物上电泳时，蛋白质混合物被分离成若干区带。 ② 薄膜电泳：使用醋酸纤维薄膜和聚酰胺薄膜。 ③ 凝胶电泳：凝胶有分子筛效应，可更好分离。如常用的聚丙烯酰胺 凝胶电泳（PAGE）。 ④ 毛细管电泳（HPCE）：毛细管散热好，有助于消除热引起的对流和 区带变宽；系统高分辨力，进样量少，可分离手性化合物。 ⑤ 等电聚焦电泳：具有不同等电点的两性电解质载体在电场中自动形 成 pH 梯度，使被分离物移动至各自等电点的 pH 处，聚集成很窄的区带。 分辨率高，适于分离分子量相同而电荷不同的两性分子。 pH 梯度制作：可利用两性电解质，已有商品出售。 2. 亲和层析：是利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法，可一步 提纯。 根据生物分子与特定固相化配体（Ligand）之间的亲和力不同，而使 生物分子在一种特制的具有专一吸附能力的吸附剂上进行层析。 例如将酶的底物或抑制剂接到固体支持物上（如琼脂糖），制成专一 吸附剂，并装在层析柱中。当含有这种酶的溶液通过层析柱时，酶就会被 吸附，而其他蛋白质则不被吸附先流出；然后再用适当缓冲液将吸附在柱 上的酶洗脱下来。 （4） 结晶： 结晶为蛋白质纯度一个标志，也是判断制品处于天然状态指标。蛋白 质纯，则易结晶，为分离提纯最后步骤