实验三线粒体的活体染色与观察 【实验目的】 掌握动、植物细胞线粒体活体染色的原理和技术。 【实验原理】 活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能者色，但又无毒害的一种染色方 法。由于碱性染料的胶粒表面带有阳离 子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而 被染部分本身具有阳离子或阴离子，因此 它们彼此之间发生吸引作用，染料就被堆 积下来，可以显示出活细胞内的某种天然 结构存在的其实性，而不影响细胞的生命 活动和产生任何物理、化学变化以引致细 胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活 状态下的细胞结构和生理、病理状态。 活体染色可分为体内活染和体外活 染两种类型。体内活染是将染料溶液以胶 图3线粒体结构模式图 体状态注入动植物体内，染料的颗粒固 定、聚集在细胞内的特殊部位，达到被识别观察的目的。体外活染又称为超活染色，该方法 从活的动、植物体内分离出部分细胞或组织，以染料溶液侵染，染料被选择性地定位在活细 胞的某种结构上而显色。 詹纳斯绿B(Janus Green B)是对线粒体具有专一性的碱性染料，毒性很小，能对动植物 的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色。詹纳斯绿B有两种状态，氧化态时呈蓝绿色， 还原态时呈无色。詹纳斯绿B染色的原理是利用线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用，使詹 纳斯绿B保持氧化状态，呈蓝绿色，可被观察到，而在周围的细胞质中，詹纳斯绿B被还原 成还原状态，呈无色，不能被观察到。 【材料、器具与试剂】 (一)材料：洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞，小麦或玉米根尖。 (二)器具：普通光学显微镜、恒温水浴锅，天平，解剖盘、剪刀、镊子、解剖刀、吸管、 载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸、牙签，1.5m离心管，量筒，烧杯。 (三)试剂： 1.Ringer溶液：称取氯化钠8.50g,氯化钙0.03g,氯化钾0.25g,溶于蒸馏水，定容至100 2.1%詹纳斯绿B溶液：称取0.5g詹纳斯绿B溶于50 ml Ringeri溶液中，稍加热(30-40C)使 之很快溶解，用滤纸过滤，即成1%溶液，储存备用。 7 实验三 线粒体的活体染色与观察 【实验目的】 掌握动、植物细胞线粒体活体染色的原理和技术。 【实验原理】 活体染色是指对生活有机体的细胞或 组织能着色，但又无毒害的一种染色方 法。由于碱性染料的胶粒表面带有阳离 子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而 被染部分本身具有阳离子或阴离子，因此 它们彼此之间发生吸引作用，染料就被堆 积下来，可以显示出活细胞内的某种天然 结构存在的真实性，而不影响细胞的生命 活动和产生任何物理、化学变化以引致细 胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活 状态下的细胞结构和生理、病理状态。 活体染色可分为体内活染和体外活 染两种类型。体内活染是将染料溶液以胶 体状态注入动植物体内，染料的颗粒固 定、聚集在细胞内的特殊部位，达到被识别观察的目的。体外活染又称为超活染色，该方法 从活的动、植物体内分离出部分细胞或组织，以染料溶液侵染，染料被选择性地定位在活细 胞的某种结构上而显色。 图 3 线粒体结构模式图 詹纳斯绿B(Janus Green B)是对线粒体具有专一性的碱性染料，毒性很小，能对动植物 的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色。詹纳斯绿B有两种状态，氧化态时呈蓝绿色， 还原态时呈无色。詹纳斯绿B染色的原理是利用线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用，使詹 纳斯绿B保持氧化状态，呈蓝绿色，可被观察到，而在周围的细胞质中，詹纳斯绿B被还原 成还原状态，呈无色，不能被观察到。 【材料、器具与试剂】 （一）材料：洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞，小麦或玉米根尖。 （二）器具：普通光学显微镜、恒温水浴锅，天平，解剖盘、剪刀、镊子、解剖刀、吸管、 载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸、牙签，1.5 ml离心管，量筒，烧杯。 （三）试剂： 1.Ringer溶液：称取氯化钠8.50g，氯化钙0.03g，氯化钾0.25g，溶于蒸馏水，定容至100 ml。 2.1%詹纳斯绿B溶液：称取0.5g詹纳斯绿B溶于50 ml Ringer溶液中，稍加热(30~40℃)使 之很快溶解，用滤纸过滤，即成1%溶液，储存备用。 7