附录三:猪胰蛋白和卵粘蛋白浓度的计算 1.猪胰蛋白酶浓度(mgml)=A280×(1/1.35)×稀释倍数 2.鸡卵粘蛋白浓度(mg/ml)=A28×(1/0413)×稀释倍数 附录四 活性测定加样顺序参照表 试剂空白杯胰酶活力抑制剂活力」 0.05mol/L pH =8.0 Tris-HCl Buffer 2.0 2.0 1.9~1.8 胰蛋白酶溶液(m) 0.2 0.2 「鸡卵粘蛋白溶液(ml) 0.001mol/L HCI( ml 1mmol/L底物(BAEE)(m1) 0.8 0.8 0.8 总体积(ml) 3.0 3.0 注:测定胰酶活性时,酶的用量约5~10μg。测鸡卵粘蛋白抑制活性时,用标准 胰蛋白酶。前几种溶液先反应2min后再加BAEE。 参考文献 Robinson, N.C.Tye, R. W, Neurath H. And walsh K A. Isolation of trypsin by Affinity 2. Frederig E and H F. Deutsch; Studies on Ovomucoid, J Biol. Chem(1949) 3. Kassell B. Proteinase inhibitors from egg white. Methods in Enzymology (1970)xlx,890. Sandberg L And J porath, Preparation of adsorbents for bio-specific Affinity Chromatography. J Chromatography (1974)90.87. 5. pedro Cuatrecasas, Protein purification by Affinity Chromatography J Biol Chem(1970)245(12)3059 6. T G. Cooper: The tools of Biochemistry Chromatography. 7.袁中一等:《固相酶与亲和层析》科学出版社1975年。 8.王重庆等,《高级生物化学实验教程》北京大学出版社1994年。256 附录三：猪胰蛋白和卵粘蛋白浓度的计算 1. 猪胰蛋白酶浓度（mg/ml）= A280 ×( 1 / 1.35 ) × 稀释倍数 2. 鸡卵粘蛋白浓度（mg/ml）= A280 × ( 1 / 0.413 ) × 稀释倍数 附录四： 活性测定加样顺序参照表 试 剂 空白杯 胰酶活力 抑制剂活力 0.05mol/L pH = 8.0 Tris-HCl Buffer ( ml ) 2.0 2.0 1.9 ~ 1.8 胰蛋白酶溶液 ( ml ) ⎯ 0.2 0.2 鸡卵粘蛋白溶液 ( ml ) ⎯ ⎯ 0.1 ~ 0.2 0.001mol/L HCl ( ml ) 0.2 ⎯ ⎯ 1 mmol/L 底物 ( BAEE ) ( ml ) 0.8 0.8 0.8 总体积 ( ml ) 3.0 3.0 3.0 注：测定胰酶活性时，酶的用量约 5 ~ 10 g 。 测鸡卵粘蛋白抑制活性时，用标准 胰蛋白酶。前几种溶液先反应 2min 后再加 BAEE。 参考文献 1. Robinson ,N.C.Tye,R. W; Neurath H. And walsh K.A. Isolation of trypsin by Affinity Chromatography .Biochemistry, (1971),10 2743. 2. Frederig E and H. F. Deutsch; Studies on Ovomucoid, J. Biol .Chem(1949),181,499. 3. KasselI.B. Proteinase inhibitors from egg white . Methods in Enzymology (1970)xIx,890.. 4. Sandberg L.And J.porath ， Preparation of adsorbents for bio-specific Affinity Chromatography. J. Chromatography (1974)90.87. 5. pedro Cuatrecasas, Protein purification by Affinity Chromatography J.Biol. Chem(1970)245 (12)3059. 6. T. G. Cooper: The tools of Biochemistry Chromatography. 7. 袁中一等：《固相酶与亲和层析》 科学出版社 1975 年。 8. 王重庆等，《高级生物化学实验教程》 北京大学出版社 1994 年