四 实验步骤 ⚫ 1、大肠杆菌菌悬液的制备 ⚫ 经活化过的大肠杆菌菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养24h。 ⚫ 加入5mL 无菌PBS洗下菌苔。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 经过滤的菌液用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。 ⚫ 2、芽胞悬液的制备 ⚫ 经活化过的枯草杆菌黑色变种菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养 3~5d，取出室温下放置5~7d，以促使其芽胞形成（要求芽胞数达90%以上）。 ⚫ 用适量的PBS洗下菌苔，菌苔液置旋涡混合器上振荡1~2 min。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 将过滤液离心（3000r/min）10 min，沉淀用PBS洗涤3次。 ⚫ 用PBS制成适当浓度的芽胞悬液。 ⚫ 芽胞悬液置于45℃水浴中保温24h后，取出，放入80℃水浴中加热10 min（或 60℃，30 min），杀死未形成芽胞的菌体。 ⚫ 将经过处理的芽胞悬液离心（3000r/min）10 min，沉淀（芽胞）再用PBS稀释 成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的芽胞悬液。 ⚫ 2、测定 ⚫ 分4组进行测定：四 实验步骤 ⚫ 1、大肠杆菌菌悬液的制备 ⚫ 经活化过的大肠杆菌菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养24h。 ⚫ 加入5mL 无菌PBS洗下菌苔。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 经过滤的菌液用PBS稀释成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的菌悬液。 ⚫ 2、芽胞悬液的制备 ⚫ 经活化过的枯草杆菌黑色变种菌种转接于营养琼脂培养基斜面，37℃下培养 3~5d，取出室温下放置5~7d，以促使其芽胞形成（要求芽胞数达90%以上）。 ⚫ 用适量的PBS洗下菌苔，菌苔液置旋涡混合器上振荡1~2 min。 ⚫ 用无菌脱脂棉过滤。 ⚫ 将过滤液离心（3000r/min）10 min，沉淀用PBS洗涤3次。 ⚫ 用PBS制成适当浓度的芽胞悬液。 ⚫ 芽胞悬液置于45℃水浴中保温24h后，取出，放入80℃水浴中加热10 min（或 60℃，30 min），杀死未形成芽胞的菌体。 ⚫ 将经过处理的芽胞悬液离心（3000r/min）10 min，沉淀（芽胞）再用PBS稀释 成含菌量为5×105~5×106cfu/mL的芽胞悬液。 ⚫ 2、测定 ⚫ 分4组进行测定：