6、Bt发展历史 7、Bt研究——1、基因鉴定(cry/ hi/vip/aii/ihnA/cyt)2、克隆、表达3、构建工程菌(细胞工程、基 因工程)4、转基因植物 Bt基因的表达和修饰 原核生物基因表达调控系统具有原核生物特性,真核生物不能识别和运用这套表达调控系统 Bt毒蛋白基因在转基因植物中的表达与其长度有关:mRNA不稳定和翻译效率低 基因修饰——置换核苷酸残基 广泛修饰:666%密码子第三位的A或T碱基被G或C·取代 密码子偏爱( codon preference 高等植物有38个偏爱的单子叶植物密码子,它们大多数第三位密码子为G或C,有44个偏爱 的双子叶植物密码子,其中第三位为A或T Btδ-内毒素基因中A+T的平均含量为64%,单子叶植物和双子叶植物中则分别为44%和55% 碱基组成的差异可能引起基因转录后异常加工大部分δ-内毒素偏爱的氨基酸密码子往往是植 物最不喜爱的密码子,尤其是在GC·含量极高的单子叶植物如玉米。因此,Btδ-内毒素基因中密 码子用法的改造会导致单子叶植物和双子叶植物上异源基因表达的增强 面临问题——工程植物的安全性、基因的表达量、基因的定位表达、昆虫的抗性 研究机构: 美国; Ecogen公司:9000株农业部 Brownsville lab,HDX系列Ohio州立大学,大量突变株 法国:巴斯德研究所(WHO昆虫病原细菌参考中心)3500株 英国:温室作物研究所 H Burges博士HB-X系列 日本:九州大学 Aizawa和Oha博士、北海道大学 IIZUKA·教授 国内:华中农大、中国林业科学院、湖北农科院、中科院武汉病毒所、南开大学、福建农大 8、Bt生产 (1)、概况 (2)产品标准化 芽孢 生物测定:初孵家蚕、菜青虫、棉铃虫、小菜蛾蛋白晶体 (3)安全性问题 (4)剂型一—(1)液剂:普遍、方便。有水剂、乳剂、油剂。(2)可湿性粉剂主产品,保存 包装、运输方便(3)胶囊剂:防止阳光、高温、干燥对芽孢和晶体的破坏,又使毒性成分逐渐释放, 保护剂可防止紫外辐射的伤害 (5)我国Bt生产现状 有机食品论证:Bt已通过,阿维菌素不行 Bt复配—①北(7)、福建(6)为主:②要和阿维(35个产品),也有和病毒(菜青虫、斜纹夜 蛾等)以及化学(杀虫丹最多,吡虫啉等)复配 质量标准化 问题:1、厂家多、规模小、质量难保证:2、种剂型单一:3、水平相对落后,后处理简单:4、质 检5、提纯6、Bt 发展历史 7、Bt 研究——1、基因鉴定（cry/chi/vip/aii/ihnA/cyt) 2、克隆、表达 3、构建工程菌（细胞工程、基 因工程）4、转基因植物 Bt 基因的表达和修饰 原核生物基因表达调控系统具有原核生物特性，真核生物不能识别和运用这套表达调控系统 Bt 毒蛋白基因在转基因植物中的表达与其长度有关； mRNA 不稳定和翻译效率低 基因修饰——置换核苷酸残基 广泛修饰：66.6％密码子第三位的 A 或 T 碱基被 G 或 C• 取代 密码子偏爱(codon preference) 高等植物有 38 个偏爱的单子叶植物密码子，它们大多数第三位密码子为 G 或 C, 有 44 个偏爱 的双子叶植物密码子，其中第三位为 A 或 T。 Btδ-内毒素基因中 A+T 的平均含量为 64％，单子叶植物和双子叶植物中则分别为 44％和 55％。 碱基组成的差异可能引起基因转录后异常加工大部分δ-内毒素偏爱的氨基酸密码子往往是植 物最不喜爱的密码子，尤其是在 GC• 含量极高的单子叶植物如玉米。因此，Btδ-内毒素基因中密 码子用法的改造会导致单子叶植物和双子叶植物上异源基因表达的增强。 面临问题——工程植物的安全性、基因的表达量、基因的定位表达、昆虫的抗性• 研究机构： 美国：Ecogen 公司：9000 株 农业部 Brownsville Lab，HD-X 系列 Ohio 州立大学，大量突变株。 法国：巴斯德研究所（WHO 昆虫病原细菌参考中心）3500 株 英国：温室作物研究所 H.Burges 博士 HB-X 系列 日本：九州大学 Aizawa 和 Ohha 博士、北海道大学 IIZUKA• 教授 国内：华中农大、中国林业科学院、湖北农科院、 中科院武汉病毒所、南开大学、福建农大 8、Bt 生产 （1）、概况 （2）产品标准化 芽孢 生物测定：初孵家蚕、菜青虫、棉铃虫、小菜蛾蛋白晶体 （3）安全性问题 （4）剂型—— (1) 液剂: 普遍、方便。有水剂、乳剂、油剂。(2) 可湿性粉剂: 主产品，保存、 包装、运输方便⑶胶囊剂: 防止阳光、高温、干燥对芽孢和晶体的破坏，又使毒性成分逐渐释放， 保护剂可防止紫外辐射的伤害 （5）我国 Bt 生产现状 有机食品论证：Bt 已通过，阿维菌素不行 Bt 复配 ——①北（7）、福建（6）为主；②要和阿维（35 个产品），也有和病毒（菜青虫、斜纹夜 蛾等）以及化学（杀虫丹最多，吡虫啉等）复配 质量标准化 问题 ：1、厂家多、规模小、质量难保证：2、种剂型单一：3、水平相对落后，后处理简单：4、质 检 5、提纯