表14-2 动物细胞培养技术的发展 年份 技术发展概要 1907年 1951年 1957年 1962年 1967年 1975年 1975年 1986年 1989 Harrison创立体外组织培养法。 Earle等开发了能促进动物细胞体外培养的培养基。 Graff用灌注培养法创造了悬浮细胞培养史上绝无仅有的1×1010～2×1010 cells/L的记录，标志着现代灌注概念的诞生。 Capstile成功地大规模悬浮培养小鼠肾细胞(BHK)，标志着动物细胞大规模培养 技术的起步。 Van Wezel用DEAE-Sephadex A 50 为载体培养动物细胞获得成功。 Sato等在培养基中用激素代替血清使垂体细胞株GH3在无血清介质中生长获得成 功，预示着无血清培养技术的诱人前景。 Kobhler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预 定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 DemoBiotech公司首次用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞生产单抗获得成功。 Konstantinovti首次提出大规模细胞培养过程中的生理状态控制，更新了传统细 胞培养工艺中优化控制之理论 一、动物细胞形态 (1)成纤维细胞型(fibrlblast或mechanocyte type) 这种细胞形态与体内成纤维细胞 形态相似故而得名。细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有圆形核，胞质向外伸出 2～3 个 长短不同的突起。细胞群常借原生质突连接成网，生长时呈放射状、漩涡或火焰状走行[如 图 14-l(a)]。除真正的纤维细胞外，凡由中胚层间充质来源的其他组织细胞，如血管内皮、 心肌、平滑肌、成骨细胞等，也多呈成纤维细胞形态。实际上很多所谓成纤维细胞并无产生 纤维的能力，只是一种习惯上概括的称法。 (2)上皮细胞型(epithilium cell type) 这种细胞呈扁平的不规则三角形，中央有圆 形核，生长时常彼此紧密连接单层细胞片[如图 14-1(b)]，起源于外胚层和内胚层组织的细 胞，如皮肤表皮及衍生物(汗腺、皮脂腺等)。肠管上皮、肝、胰和肺泡上皮细胞。培养时皆 呈上皮型。 (3)游走细胞型(wondering cell type) 这种细胞的培养需要在支持物上生长，一般不 连接成片，细胞胞质经常出现伪足或突起，呈活跃的游走和变形运动，速度快而且方向不规 则[如图 14-1(c)]。此型细胞不很稳定，有时亦难和其他型细胞相区别，在一定条件下，如 培养基化学性质变动等，它们也可能变为成纤维细胞型。 (4)多形性细胞型(polymorphic cell type) 除上述三种细胞外，还有一些组织和细胞， 如神经组织的细胞等，难以确定它们的稳定形态，可统归多形性细胞[如图 14-1(d)]。 上述这四种细胞形态均属于贴壁依赖型细胞，培养这类细胞时，常需贴附在支持物上生 长。但由于培养环境的变化，细胞形态常发生改变。 (5)悬浮型细胞这类细胞常呈圆形，不贴附在支持物上，呈现悬浮状态生长。如血液细 胞，淋巴组织细胞及肿瘤细胞。培养这类细胞也可采用微生物培养的方法进行悬浮物培养。 二、动物细胞培养基组成及制备 1、培养基的组成 动物细胞培养的培养基分为天然培养基和合成培养基两大类。天然培养基使用最早，营 养成分高，也最为有效。但成分复杂，个体差异大，来源也缺乏，因而使用受到限制。动物 血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，血清含有丰富的营养物质，包括大分子蛋白质和