(2)抗血清效价测定：将猪血清（抗原）加入中心孔，将兔抗猪1gG(抗体)作2倍比稀释， 即1：2、1：4、1：8、1：16、1：32等，分别加至周围孔中。或者是将小鹅瘟琼扩抗原加入中心孔，周 围孔加入1：2、1：4、1：8、1：16、1：32等稀释的小鹅瘟抗血清。 (3)抗原检测：将兔抗猪1gG(抗血清)加入中心孔，将待测抗原（猪血清、鸡血清、兔血 清、牛血清、羊血清等)置于周围孔中。或者是将鸡传染性法氏囊病阳性血清加入中心孔，周围孔 加鸡传染性法氏囊病琼扩抗原（或待检法氏囊组织浸提液）。 5.感作：将琼脂凝胶板加盖保湿，置于37℃温箱，24-48h后，判定结果。 6.结果判定 (1)血清流行病学调查：待检孔与阳性孔出现的沉淀带完全融合者判为阳性。待检血清无沉淀 带或所出现的沉淀带与阳性对照的沉淀带完全交叉者判为阴性。 (2)抗血清效价测定：以出现沉淀带的血清最高稀释倍数为抗血清的AGP效价。 (3)抗原检测：兔抗猪1gG与猪血清孔之间有明显沉淀带，与其他血清孔之间不形成沉淀带。 鸡传染性法氏囊病阳性血清与鸡传染性法氏囊病琼扩抗原孔之间出现沉淀带，如与待组织浸提液孔 之间出现沉淀带，说明该法氏囊组织中有鸡传染性法氏囊病病毒抗原。 (二)对流免疫电泳 在H值86的琼脂凝胶中，抗体球蛋白带有微弱的负电荷，在电泳时，由于电渗作用的影响，抗 体球蛋白反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷，在电泳力的作用下向正极移动。二者在两 孔之间相遇，形成肉眼可见的白色沉淀线。 本法由于抗原抗体分子在电场作用下定向运动，限制了自由扩散，从而提高了敏感性，它较琼 脂扩散试验敏感性高10-16倍，并可大大缩短沉淀线出现的时间，适用于快速诊断。 1.琼脂板制备：用巴比妥缓冲液配制1%-1.5%琼脂凝胶板，厚度2-3mm。 2.打孔：孔径3-5mm,孔距4-10mm,一张载玻片可打12个孔，挑去孔内琼脂，封底。 3.加样：一对孔中，一孔加己知（或待测）抗原，另一孔加待测（或己知）抗体。 4。电泳：在电泳槽内加入p8.6的巴比妥缓冲液，将滤纸片放入缓冲液内浸湿搭桥。将抗原 孔置于负极端。电压2.5-6V/cm,或电流强度3-5A/cm,电泳时间为30-90min。 5。结果观察：断电后，将凝胶板置于灯光下，衬以黑色背景观察。阳性者则在抗原与抗体孔 之间形成一条清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰，可将琼脂凝胶板放在湿盒中37℃数小时或 置电泳槽过夜再观察。 [思考题] 1.琼脂扩散沉淀试验的操作方法及其应用。 2.对流免疫电泳的原理是什么？ 实验三间接血凝实验 （2）抗血清效价测定：将猪血清（抗原）加入中心孔，将兔抗猪IgG（抗体）作2倍比稀释， 即 l:2、1:4、1:8、l:16、1:32等，分别加至周围孔中。或者是将小鹅瘟琼扩抗原加入中心孔，周 围孔加入l:2、1:4、1:8、l:16、1:32等稀释的小鹅瘟抗血清。 （3）抗原检测：将兔抗猪IgG（抗血清）加入中心孔，将待测抗原（猪血清、鸡血清、兔血 清、牛血清、羊血清等）置于周围孔中。或者是将鸡传染性法氏囊病阳性血清加入中心孔，周围孔 加鸡传染性法氏囊病琼扩抗原（或待检法氏囊组织浸提液）。 5. 感作：将琼脂凝胶板加盖保湿，置于37℃温箱，24-48h后，判定结果。 6. 结果判定 （1）血清流行病学调查：待检孔与阳性孔出现的沉淀带完全融合者判为阳性。待检血清无沉淀 带或所出现的沉淀带与阳性对照的沉淀带完全交叉者判为阴性。 （2）抗血清效价测定：以出现沉淀带的血清最高稀释倍数为抗血清的AGP效价。 （3）抗原检测：兔抗猪IgG与猪血清孔之间有明显沉淀带，与其他血清孔之间不形成沉淀带。 鸡传染性法氏囊病阳性血清与鸡传染性法氏囊病琼扩抗原孔之间出现沉淀带，如与待组织浸提液孔 之间出现沉淀带，说明该法氏囊组织中有鸡传染性法氏囊病病毒抗原。 （二）对流免疫电泳 在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白带有微弱的负电荷，在电泳时，由于电渗作用的影响，抗 体球蛋白反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质带负电荷，在电泳力的作用下向正极移动。二者在两 孔之间相遇，形成肉眼可见的白色沉淀线。 本法由于抗原抗体分子在电场作用下定向运动，限制了自由扩散，从而提高了敏感性，它较琼 脂扩散试验敏感性高10-16倍，并可大大缩短沉淀线出现的时间，适用于快速诊断。 1. 琼脂板制备：用巴比妥缓冲液配制1%-1.5% 琼脂凝胶板，厚度2-3mm。 2. 打孔：孔径3-5mm，孔距4-10mm，一张载玻片可打12个孔，挑去孔内琼脂，封底。 3. 加样：一对孔中，一孔加已知（或待测）抗原，另一孔加待测（或已知）抗体。 4. 电泳：在电泳槽内加入pH 8.6的巴比妥缓冲液，将滤纸片放入缓冲液内浸湿搭桥。将抗原 孔置于负极端。电压2.5-6V/cm，或电流强度3-5mA/cm，电泳时间为30-90min 。 5. 结果观察：断电后，将凝胶板置于灯光下，衬以黑色背景观察。阳性者则在抗原与抗体孔 之间形成一条清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰，可将琼脂凝胶板放在湿盒中37℃数小时或 置电泳槽过夜再观察。 [思考题] 1. 琼脂扩散沉淀试验的操作方法及其应用。 2. 对流免疫电泳的原理是什么？ 实验三 间接血凝实验