本章习题要点： l.什么是细菌的限制一修饰系统(restriction-modificationsystem,R-Msystem) 2.细菌的限制一修饰系统有什么意义？ 3,说明限制性内切核酸酶的命名原则要点， 4.作为基因克隆的载体必须具备那些特性？ 第三章基因工程的常规技术(12学时) 教学重点：电泳、PCR、杂交、测序的基本原理和操作步骤。 教学难点：PCR的应用：DNA与蛋白质的相互作用。 教学要求：掌握基因的分子克隆等基本技术的概念，以及重组体的概念和其鉴定方法，了解其 方法的基本原理和基本操作步骤，最主要的是基因的分子克隆技术。 第一节凝胶电泳技术 1.琼脂糖凝胶电泳的原理 2.琼脂糖凝胶电泳的影响因素 第二节杂交技术 1.探针与探针标记 2.Southern杂交 3.Northern杂交 4 Western方 5.菌落（嗜菌斑）原位杂交 第三节PCR技术 L.PCR技术的基本成分 2.PCR技术的原理和过程 3.荧光定量PCR 第四节生物芯片 1.DNA芯片 2.蛋白质芯片 第五节基因文库构建 1堪因组文库物律 2.cDNA文库的构建 第六节酵母双杂交系统 1.酵母双杂交系统的基本原理 2.酵母双杂交系统的应用 3.酵母双杂交系统存在的问题 第七节DNA测序 1.Sanger双脱氧链终止法 2.Maxam-Gilbert化学修饰法 本章习题要点 1、何谓PCR引物？试述其设计原则。 2、蛋白质的包含体形式表达时，折叠复性方法应具备哪些特点？ 第四章基因在大肠杆菌、酵母的高效表达(3学时) 教学重点：大肠杆菌基因表达载体构建的基因元件及常见大肠杆菌基因表达系统，基因融合的 策略及其优点 教学难点：外源基因在大肠杆菌中表达的基本条件、常用表达载体及提高表达的措施。 大肠杆菌基因表达系乡 其因表达产物 元件：掌握功能启动子分离的方法。 第一节基因的表达系统与表达策略 1.基因的表达系统 2.根据表达蛋白用途选择基因的表达策略 第二节基因在大肠杆菌中的高效表达 1.基于T7噬菌体RNA聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统 2.蛋白质的融合表达 3.蛋白质的分泌型表达 4.蛋白质的包含体形式表达与蛋白质复性本章习题要点： 1．什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificationsystem，R-Msystem) 2．细菌的限制—修饰系统有什么意义? 3．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 4．作为基因克隆的载体必须具备那些特性？ 第三章 基因工程的常规技术（12 学时） 教学重点：电泳、PCR、杂交、测序的基本原理和操作步骤。 教学难点：PCR的应用；DNA与蛋白质的相互作用。 教学要求：掌握基因的分子克隆等基本技术的概念，以及重组体的概念和其鉴定方法，了解其 方法的基本原理和基本操作步骤，最主要的是基因的分子克隆技术。 第一节 凝胶电泳技术 1. 琼脂糖凝胶电泳的原理 2. 琼脂糖凝胶电泳的影响因素 第二节 杂交技术 1. 探针与探针标记 2. Southern杂交 3. Northern杂交 4. Western杂交 5. 菌落（嗜菌斑）原位杂交 第三节 PCR技术 1. PCR技术的基本成分 2. PCR技术的原理和过程 3. 荧光定量PCR 第四节 生物芯片 1. DNA芯片 2. 蛋白质芯片 第五节 基因文库构建 1. 基因组文库构建 2. cDNA 文库的构建 第六节 酵母双杂交系统 1. 酵母双杂交系统的基本原理 2. 酵母双杂交系统的应用 3. 酵母双杂交系统存在的问题 第七节DNA测序 1. Sanger 双脱氧链终止法 2. Maxam-Gilbert 化学修饰法 本章习题要点： 1、何谓PCR引物？试述其设计原则。 2、蛋白质的包含体形式表达时，折叠复性方法应具备哪些特点？ 第四章 基因在大肠杆菌、酵母的高效表达（ 3 学时） 教学重点：大肠杆菌基因表达载体构建的基因元件及常见大肠杆菌基因表达系统，基因融合的 策略及其优点 教学难点：外源基因在大肠杆菌中表达的基本条件、常用表达载体及提高表达的措施。 基本要求：掌握外源基因表达条件及影响表达的因素，大肠杆菌基因表达系统；了解基因表达产物 的检测方法；掌握表达载体、融合基因、融合蛋白的概念；掌握大肠杆菌基因表达载体构建的基本 元件；掌握功能启动子分离的方法。 第一节 基因的表达系统与表达策略 1. 基因的表达系统 2. 根据表达蛋白用途选择基因的表达策略 第二节 基因在大肠杆菌中的高效表达 1. 基于T7噬菌体RNA 聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统 2. 蛋白质的融合表达 3. 蛋白质的分泌型表达 4. 蛋白质的包含体形式表达与蛋白质复性