别和结合有多个位点。同时,苯丙氨酸是羧肽酶A的竞争性抑制剂 42酶活性中心化学基团的鉴定 常用的方法有化学修饰法、反应动力学法和x-光晶体衍射法。 ) N-C-coH)亚位点 亚仪点3 亚位点2 亚位点2 亚位点4 亚位点5 羧肽酶A活性中心的拓扑学 苯丙氪酸是反应的竟争性抑制剂 42.1化学修饰法 酶分子中有许多氨基酸残基的侧链基团可以被化学修饰,如羟基、巯基、咪唑基、氨基、羧 基等。如果一个基团是必需的,则被修饰后酶活性会大大下降,甚至完全失活 42.1.1使用非特异性试剂对特殊基团的标记 非特异性试剂可以修饰特定的某种基团,但不能区分活性中心内部和外部的基团。如果某种 基团只存在于活性中心,而其他部位没有,就可以用非特异性试剂修饰。如木瓜蛋白酶( papain) 分子中有7个半胱氨酸残基,其中的6个形成3对二硫键,只有一个以自由巯基的形式存在于活 性中心(Cy≌2-63,Cys56-95,Cys153-20,自由Cys25;编号从N端开始往C端进行)。在这 种情况下就可以用任何一种硫氢基试剂来修饰,如用碘乙酸修饰。碘乙酸对木瓜蛋白酶的活性中 心无任何特殊亲和力,但由于这种特殊情况,仍然得到了巯基的修饰与酶活性的丧失相平行的结 果 另外,通过动力学实验证实,还有一个组氨酸残基的咪唑基位于木瓜蛋白酶活性中心的催化 部位(木瓜蛋白酶共有212个氨基酸,有His81和Hs159两个Hs) Husain和Lowe用1,3 溴丙酮修饰木瓜蛋白酶,在pH56,1克当量的试剂完全抑制了木瓜蛋白酶的活性。对修饰后的 酶进行氨基酸分析,发现少一个组氨酸。在用1,3-二溴丙酮(2-1C)的修饰实验中,发现修饰剂2 别和结合有多个位点。同时，苯丙氨酸是羧肽酶 A 的竞争性抑制剂。 4.2 酶活性中心化学基团的鉴定 常用的方法有化学修饰法、反应动力学法和 x-光晶体衍射法。 4.2.1 化学修饰法 酶分子中有许多氨基酸残基的侧链基团可以被化学修饰，如羟基、巯基、咪唑基、氨基、羧 基等。如果一个基团是必需的，则被修饰后酶活性会大大下降，甚至完全失活。 4.2.1.1 使用非特异性试剂对特殊基团的标记 非特异性试剂可以修饰特定的某种基团，但不能区分活性中心内部和外部的基团。如果某种 基团只存在于活性中心，而其他部位没有，就可以用非特异性试剂修饰。如木瓜蛋白酶（papain） 分子中有 7 个半胱氨酸残基，其中的 6 个形成 3 对二硫键，只有一个以自由巯基的形式存在于活 性中心（Cys22-63，Cys56-95，Cys153-200，自由 Cys25；编号从 N 端开始往 C 端进行）。在这 种情况下就可以用任何一种硫氢基试剂来修饰，如用碘乙酸修饰。碘乙酸对木瓜蛋白酶的活性中 心无任何特殊亲和力，但由于这种特殊情况，仍然得到了巯基的修饰与酶活性的丧失相平行的结 果。 另外，通过动力学实验证实，还有一个组氨酸残基的咪唑基位于木瓜蛋白酶活性中心的催化 部位（木瓜蛋白酶共有 212 个氨基酸，有 His81 和 His159 两个 His）。Husain 和 Lowe 用 1,3-二 溴丙酮修饰木瓜蛋白酶，在 pH5.6，1 克当量的试剂完全抑制了木瓜蛋白酶的活性。对修饰后的 酶进行氨基酸分析，发现少一个组氨酸。在用 1,3-二溴丙酮（2- 14C）的修饰实验中，发现修饰剂