(七)底物浓度对催化反应速度的影响及来米氏常数K和最大反 应速度V的测定 根据 Michaelis-Menten方程 V mx LS Km+S 可以得到 Lineweaver-Burk双倒数值线方程: 1Km11 在1NV纵轴上的截距是I/max,在1/[S]横轴上的截距是一1/Kr 测定Km和Vmx,特别是测定Km,是酶学研究的基本内容之一,Km是酶的一个基 本的特性常数,它包含着酶与底物结合和解离的性质,特别是同一种酶能够作用于几种 不同的底物时,米氏常数Kn往往可以反映出酶与各种底物的亲和力强弱,Km值越大, 说明酶与底物的亲和力越弱,反之,Km值越小,酶与底物的亲和力越强 双倒数作图法应用最广泛,其优点是:①可以精确地测定Km和Vmax:②根据是 否偏离线性很容易看出反应是否违反 Michaelis- Menten动力学;③可以较容易地分析 各种抑制剂的影响。此作法的缺点是实验点不均匀,V小时误差很大。为此,建议采用 种新的 Eisenthal直线作图法,即将 Michaelis-Menten方程改变为 Vmx=v+l K 作图时,在纵轴和横轴上截取每对实验值:V1~[S]1;V2~[S]2:V3~[S]3 连接诸二截点,得多条直线相交于一点,由此点即可得Km和Vnax 此作图法的优点是:①不用作双倒数计算:②很容易识别出那些不正确的测定结 还可以用 Hanes方程进行作图,斜率是1/m,截距分别是一Km和Km/Vmax SJ=km+I[S 实验方法: 1.本实验和下一个实验均采用 Nelsons法分析反应产物还原糖, Nelsons法的试剂配 235235 （七）底物浓度对催化反应速度的影响及来米氏常数 Km和最大反 应速度 Vmax的测定 根据 Michaelis-Menten 方程： 可以得到 Lineweaver-Burk 双倒数值线方程： 在 1/V 纵轴上的截距是 1/Vmax ，在 1/［S］横轴上的截距是－1/Km。 测定 Km 和 Vmax，特别是测定 Km，是酶学研究的基本内容之一，Km是酶的一个基 本的特性常数，它包含着酶与底物结合和解离的性质，特别是同一种酶能够作用于几种 不同的底物时，米氏常数 Km往往可以反映出酶与各种底物的亲和力强弱，Km值越大， 说明酶与底物的亲和力越弱，反之，Km值越小，酶与底物的亲和力越强。 双倒数作图法应用最广泛，其优点是：① 可以精确地测定 Km 和 Vmax；② 根据是 否偏离线性很容易看出反应是否违反 Michaelis-Menten 动力学；③ 可以较容易地分析 各种抑制剂的影响。此作法的缺点是实验点不均匀，V 小时误差很大。为此，建议采用 一种新的 Eisenthal 直线作图法，即将 Michaelis-Menten 方程改变为： 作图时，在纵轴和横轴上截取每对实验值：V1～［S］1；V2～［S］2；V3～［S］3； ——连接诸二截点，得多条直线相交于一点，由此点即可得 Km和 Vmax。 此作图法的优点是：① 不用作双倒数计算；② 很容易识别出那些不正确的测定结 果。 还可以用 Hanes 方程进行作图，斜率是 1/Vmax，截距分别是－Km和 Km/Vmax : 实验方法： 1. 本实验和下一个实验均采用 Nelson's 法分析反应产物还原糖，Nelson's 法的试剂配 ［ ］ ［ ］ K S V S V m + = max max max 1 1 1 V S V K V m =  + ［ ］ Km S V V V ［ ］ max = + ［ ］ ［ ］ S V V K V S m max max 1 = +