材料送检样品、四唑、靛蓝。 仪器玻璃板、刷子、镊子、解剖刀、培养皿、小烧杯、手持放大镜。 三、内容和方法 种子潜在的发芽能力称为种子的生活力。用化学试剂使种子染色的方法,可以测定种子 的潜在的发芽能力。特别对有些休眠期长、难于进行发芽测定的树种种子,采用染色法测定 其生活力,具有明显的优越性。 测定种子生活力时,从纯净种子中,随机取25粒或50粒,共取四组,即为四次重复 由于各种种子的内含物不同,对试剂的反应也不同,可分别选用靛蓝或四唑测定种子生活力 (一)酸性靛蓝(靛蓝胭脂红)染色法 靛蓝为蓝色粉末,分子式为Ci6HsN2O2(SO3)Na2 靛蓝能透过死细胞组织而染上颜色,根据胚染色部位和比例判断种子生活力。靛蓝用蒸 馏水配成浓度为005~01%的溶液,如发现溶液有沉淀,可适当加量,最好随配随用,不宜 存放过久 1、浸种 将四组样品浸温水中,浸时间因树种而异。松属树种的种子在室温条件下浸2-3天 2、取胚 剥种胚要细心,勿使胚损伤,要挑出空粒、腐坏和有病虫害的种粒,并计入附表5。剥 出的胚先放入盛有清水或垫湿纱布的器皿中。全部剥完后再放入靛蓝溶液中,使溶液淹没种 胚,上浮者要压沉。 3、染色 染色时间因温度、树种而异,温度在20~30℃时需2~3小时:温度低于20℃要适当延 长染色时间;温度低于10℃则染色困难,甚至不能染色 4、观察记载 到达染色所规定的时间之后到出溶液,用清水冲洗种胚,立即将种胚放在垫湿纱布的器 皿中。根据染色部位和比例大小来判断每一种胚有无生活力。计入附表6中。以松属为例 靛蓝法测定种子生活力的主要标志如下: 有生活力者:胚全部未染色:胚根尖端少量染色:胚基部分有斑点状染色,但染色部位 未成环状;子叶少许斑点染色。 无生活力者:胚全部被染色:胚根全长1/3或超过1/3部分染色:胚基部分包括分生组 织在内的种胚全长的1/3的部分染色;子叶染色。 5、结果计算 分别统计各组有生活力种子的百分率,并计算四次重复的平均值。平均值计算到整数 按表7的规定检査几个重复间的差异是否为随机误差。如果各重复中最大值与最小值的差距 没有超过容许范围,就用各个重复的平均值作为测定的生活力。 (二)四唑染色法 氯化(或溴化)三苯基四唑,简称为四唑,为白色粉末,分子式为CH12NCL(B1)。 四唑的水溶液无色。被种子吸收的四唑盐参与细胞的还原过程。染色的是活细胞,未染 色的为死细胞。以染色的位置和比例大小判断种子有无生活力 配制四唑溶液时,用中性蒸馏水(pH6s-η)溶解,浓度用0.~1%,一半用0.5%。浓度 高,染色时间短。用磷酸盐缓冲溶解四唑盐。缓冲液的配制如下:溶液(甲)在1000毫升 水中溶解9.078克KH2PO4;溶液(乙)在1000毫升水中溶解11876克Na2HPO4。取溶液 (甲)400毫升及溶液(乙)600毫升混在一起,将5克四唑盐溶解于配制的1000毫升缓冲 溶液中,即得到pH70的05%四唑溶液。须将配好的溶液贮存在黑暗或棕色瓶里,以免照 光而变质。这种溶液可在室温下保存几个月,但每次用后溶液作废材料 送检样品、四唑、靛蓝。 仪器 玻璃板、刷子、镊子、解剖刀、培养皿、小烧杯、手持放大镜。 三、内容和方法 种子潜在的发芽能力称为种子的生活力。用化学试剂使种子染色的方法，可以测定种子 的潜在的发芽能力。特别对有些休眠期长、难于进行发芽测定的树种种子，采用染色法测定 其生活力，具有明显的优越性。 测定种子生活力时，从纯净种子中，随机取 25 粒或 50 粒，共取四组，即为四次重复。 由于各种种子的内含物不同，对试剂的反应也不同，可分别选用靛蓝或四唑测定种子生活力。 （一）酸性靛蓝（靛蓝胭脂红）染色法 靛蓝为蓝色粉末，分子式为 C16H8N2O2(SO3)2Na2. 靛蓝能透过死细胞组织而染上颜色，根据胚染色部位和比例判断种子生活力。靛蓝用蒸 馏水配成浓度为 0.05~0.1%的溶液，如发现溶液有沉淀，可适当加量，最好随配随用，不宜 存放过久。 1、 浸种 将四组样品浸温水中，浸时间因树种而异。松属树种的种子在室温条件下浸 2~3 天。 2、 取胚 剥种胚要细心，勿使胚损伤，要挑出空粒、腐坏和有病虫害的种粒，并计入附表 5。剥 出的胚先放入盛有清水或垫湿纱布的器皿中。全部剥完后再放入靛蓝溶液中，使溶液淹没种 胚，上浮者要压沉。 3、 染色 染色时间因温度、树种而异，温度在 20~30℃时需 2~3 小时；温度低于 20℃要适当延 长染色时间；温度低于 10℃则染色困难，甚至不能染色。 4、 观察记载 到达染色所规定的时间之后到出溶液，用清水冲洗种胚，立即将种胚放在垫湿纱布的器 皿中。根据染色部位和比例大小来判断每一种胚有无生活力。计入附表 6 中。以松属为例， 靛蓝法测定种子生活力的主要标志如下： 有生活力者：胚全部未染色；胚根尖端少量染色；胚基部分有斑点状染色，但染色部位 未成环状；子叶少许斑点染色。 无生活力者：胚全部被染色；胚根全长 1/3 或超过 1/3 部分染色；胚基部分包括分生组 织在内的种胚全长的 1/3 的部分染色；子叶染色。 5、 结果计算 分别统计各组有生活力种子的百分率，并计算四次重复的平均值。平均值计算到整数。 按表 7 的规定检查几个重复间的差异是否为随机误差。如果各重复中最大值与最小值的差距 没有超过容许范围，就用各个重复的平均值作为测定的生活力。 （二）四唑染色法 氯化（或溴化）三苯基四唑，简称为四唑，为白色粉末，分子式为 C10H12N4CL（Br）。 四唑的水溶液无色。被种子吸收的四唑盐参与细胞的还原过程。染色的是活细胞，未染 色的为死细胞。以染色的位置和比例大小判断种子有无生活力。 配制四唑溶液时，用中性蒸馏水（pH6.5~7）溶解，浓度用 0.1~1%，一半用 0.5%。浓度 高，染色时间短。用磷酸盐缓冲溶解四唑盐。缓冲液的配制如下：溶液（甲）在 1000 毫升 水中溶解 9.078 克 KH2PO4；溶液（乙）在 1000 毫升水中溶解 11.876 克 N a2HPO4。取溶液 （甲）400 毫升及溶液（乙）600 毫升混在一起，将 5 克四唑盐溶解于配制的 1000 毫升缓冲 溶液中，即得到 pH7.0 的 0.5%四唑溶液。须将配好的溶液贮存在黑暗或棕色瓶里，以免照 光而变质。这种溶液可在室温下保存几个月，但每次用后溶液作废