这16个温度是冰水浴的0℃,室温(约20℃),沸水浴的100℃和13个水浴温度:10℃ 30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、 95℃C 每个温度准备2支试管,一支加酶,测酶催化,1支不加,以乙酸缓冲液作为酸 测酸催化 确定酶的稀释倍数,试管中加入02m0.2 mol/L pH4.9的乙酸缓冲液,0.2m稀释的 酶,加水至0.8ml加入0.2ml0.2molL的蔗糖开始计时,在室温下反应10min,仍用费 林试剂法进行测定,须得到0.2~03A的吸光度,准备一个水的空白对照管(08m去离 子水加02ml0.2molL的蔗糖),用于测定所有的样品管 2.测定上列各个温度下的反应速度,每次用2支试管,均加入02ml乙酸缓冲液 支加02m酶,另一支不加酶,均用水调至0.8ml,放入水浴温度下使反应物平衡30秒, 加入0.2mol/L蔗糖0.2ml,准确反应10分钟,立即加入10m碱性铜试剂中止反应,按 规定进行操作,测定各管A650值,记录每个水浴的准确温度。 3.酶催化的各管A60值均进行酸催化的校正。用分别画出酶催化和酸催化的反应速 度对温度的关系曲线和lnk~1/的关系曲线,用二条lnk~1/关系曲线的线性部分计 算两种活化能 (文献值:蔗糖酶催化蔗糖水解的活化能为:Ea=8000CaJ/ mole 酸催化蔗糖水解的活化能为:Ea=25000Ca/mole) 4.计算温度系数Q10,即温度每升高10℃,反应速度提高的倍数: VI kr 请推导计算公式 10×Ea In O10 R×T×(T+10)234 这 16 个温度是冰水浴的 0℃，室温（约 20℃），沸水浴的 100℃和 13 个水浴温度：10℃、 30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、 95℃。 每个温度准备 2 支试管，一支加酶，测酶催化，1 支不加，以乙酸缓冲液作为酸， 测酸催化。 1. 确定酶的稀释倍数，试管中加入 0.2ml 0.2mol/L pH4.9 的乙酸缓冲液，0.2ml 稀释的 酶，加水至 0.8ml 加入 0.2ml 0.2mol/L 的蔗糖开始计时，在室温下反应 10min，仍用费 林试剂法进行测定，须得到 0.2～0.3A 的吸光度，准备一个水的空白对照管（0.8ml 去离 子水加 0.2ml 0.2mol/L 的蔗糖），用于测定所有的样品管。 2. 测定上列各个温度下的反应速度，每次用 2 支试管，均加入 0.2ml 乙酸缓冲液，一 支加 0.2ml 酶，另一支不加酶，均用水调至 0.8ml，放入水浴温度下使反应物平衡 30 秒， 加入 0.2mol/L 蔗糖 0.2ml，准确反应 10 分钟，立即加入 1.0ml 碱性铜试剂中止反应，按 规定进行操作，测定各管 A650 值，记录每个水浴的准确温度。 3. 酶催化的各管 A650 值均进行酸催化的校正。用分别画出酶催化和酸催化的反应速 度对温度的关系曲线和 lnk～1/T 的关系曲线，用二条 lnk～1/T 关系曲线的线性部分计 算两种活化能。 （文献值：蔗糖酶催化蔗糖水解的活化能为：Ea=8000Cal/mole 酸催化蔗糖水解的活化能为：Ea=25000Cal/mole） 4. 计算温度系数 Q10，即温度每升高 10℃，反应速度提高的倍数： 请推导计算公式： T T T T k k V V Q ( 10) ( 10) 10 + + = ≌ ( 10) 10 ln 10   +  = R T T E Q a