蛋白质实验技术模块教案 一、教学内容： 1、 蛋白质分离纯化与分析 ： 每 2 人一组，共 18—19 组×2,每组 5d,5×9=45 学时 ×2。 2、 DNA 的制备与分析 ： 每 2 人一组,共 18~19 组×2 班,每组 2d,2×9×2=36 学 时。 二、具体内容： cytc 分离一天。 生物大分子制备的原理 2 学时。 PAGE,PI—PAGE,SDS—PAGE 原理 2 学时。 Sephadex G100 等层析原理 2 学时。 分离物的 Sephadex G100 纯化,1.5d。 分离,纯化过程中所获阶段样品的 SDS—PAGE 跟踪及分度分析,1.5d。 纯化物的进一步分析的设想,2 学时。 DNA 分离纯化原理及注意事项,2 学时。 兔肝 DNA 的分离纯化,1d。 DNA 的理化性质分析， 7 学时。 三、教学目的: 1、 模拟生化大分子制备的全过程开展较为系统性的训练。 2、 掌握现代仪器在生化样品制备与分析中的应用及其原理。 3、 掌握两类生物大分子分离纯化,理化性质分析的基本原理及注意事项。 四、cytc 的分离： （一） 实验方法步骤见教学讲义 P21。 （二） 各步骤的基本目的与要求： 取材——猪心，要求新鲜，cytc 未被破坏，含 cytc 高，材料易得。 加等量 0.145mol/l TCA，使 cytc 从线粒体膜上解聚下来，使呈酸性可 溶状态。 过滤——去杂质。 调 PH 至 7.3——以利于（NH4）2SO4 沉淀去杂蛋白，缓慢添加。 第二次加（NH4）2SO4 的作用是进一步去除杂蛋白，缓慢添加。 两次添加（NH4）2SO4 后，cytc 仍呈可溶性。 静置过中午或至少 2h，目的是解水合，使蛋白质凝聚成絮状，以利于 通过离心方法去沉淀。 加入 20%TCA（25mol/l 上清）——沉淀 cytc。 透析——去掉酸，去小分子，为上 Sephadex G100 作准备。 透析要求：低温，不漏，换透析液，用 Ba+方法检查透析的效果。 五、离心机： 1． 类型：实验室用与工业用，间歇式与连续式，冷冻式与不冷冻式，地 面式与桌式，普通离心机和高速离心机与超速离心机，制备式与分析 式。 2． 实验室常用离心机： 普通离心机——台式（3000-16000rpm）和地面式（3000-6000rpm），蛋白质实验技术模块教案 一、教学内容： 1、 蛋白质分离纯化与分析 ： 每 2 人一组，共 18—19 组×2,每组 5d,5×9=45 学时 ×2。 2、 DNA 的制备与分析 ： 每 2 人一组,共 18~19 组×2 班,每组 2d,2×9×2=36 学 时。 二、具体内容： cytc 分离一天。 生物大分子制备的原理 2 学时。 PAGE,PI—PAGE,SDS—PAGE 原理 2 学时。 Sephadex G100 等层析原理 2 学时。 分离物的 Sephadex G100 纯化,1.5d。 分离,纯化过程中所获阶段样品的 SDS—PAGE 跟踪及分度分析,1.5d。 纯化物的进一步分析的设想,2 学时。 DNA 分离纯化原理及注意事项,2 学时。 兔肝 DNA 的分离纯化,1d。 DNA 的理化性质分析， 7 学时。 三、教学目的: 1、 模拟生化大分子制备的全过程开展较为系统性的训练。 2、 掌握现代仪器在生化样品制备与分析中的应用及其原理。 3、 掌握两类生物大分子分离纯化,理化性质分析的基本原理及注意事项。 四、cytc 的分离： （一） 实验方法步骤见教学讲义 P21。 （二） 各步骤的基本目的与要求： 取材——猪心，要求新鲜，cytc 未被破坏，含 cytc 高，材料易得。 加等量 0.145mol/l TCA，使 cytc 从线粒体膜上解聚下来，使呈酸性可 溶状态。 过滤——去杂质。 调 PH 至 7.3——以利于（NH4）2SO4 沉淀去杂蛋白，缓慢添加。 第二次加（NH4）2SO4 的作用是进一步去除杂蛋白，缓慢添加。 两次添加（NH4）2SO4 后，cytc 仍呈可溶性。 静置过中午或至少 2h，目的是解水合，使蛋白质凝聚成絮状，以利于 通过离心方法去沉淀。 加入 20%TCA（25mol/l 上清）——沉淀 cytc。 透析——去掉酸，去小分子，为上 Sephadex G100 作准备。 透析要求：低温，不漏，换透析液，用 Ba+方法检查透析的效果。 五、离心机： 1． 类型：实验室用与工业用，间歇式与连续式，冷冻式与不冷冻式，地 面式与桌式，普通离心机和高速离心机与超速离心机，制备式与分析 式。 2． 实验室常用离心机： 普通离心机——台式（3000-16000rpm）和地面式（3000-6000rpm）