延伸阅读7-3 ELISA检测 一、ELISA检测原理与分类 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)检测原理是预先结合在固相载体上的抗 体或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免疫学反应，免疫复合物所携带的酶分子可将 特定的底物分子转化为具有特定颜色的化合物，并由颜色的深浅反映样品中抗原或抗体分子的量。ELSA 检测具有灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操作等特点，它是20世纪70年代初由E.Engvall及 B.K.VanWeemen等在放射免疫分析的基础上建立起来的一种非均相的酶免疫检测技术。 根据检测目标的不同可以细分为检测抗体的间接法（图7-3S1)和检测抗原的双抗原夹心法（图7-3S2)。 (一)检测抗体的间接法 该方法的主要操作步骤为：①固相抗原的形成将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未 结合的抗原及杂质。②固相抗原抗体复合物的形成加入待检样品，保温反应，样品中的特异抗体与固相抗 原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。③加酶标抗抗体固相免疫 复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体 的量正相关。④加底物显色加入相应的底物进行显色，通过颜色定量分析。 (二)检测抗原的双抗原夹心法 该方法的主要操作步骤为：①固相抗体的形成将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未 结合的抗体及杂质。②固相抗原抗体复合物的形成加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合， 形成固相抗原抗体复合物，洗涤除去其他未结合物质。③加酶标抗体固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体 结合，进行保温反应。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相 关。④加底物显色固相上的酶催化底物成为有色产物，通过比色，测知标本中抗原的量。 二、ELISA检测技术的应用与发展 (一)致病微生物检测 ELISA法可用于检测食品中单核细胞增生李斯特菌、弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌、军团菌、假单胞菌 属、大肠杆菌O157:H7、致贺氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌和腊样芽抱杆菌等多种致病微生物，在病原 微生物检测方面具有很大的发展空间。 (二)毒素检测 ELISA技术除了应用于食品中黄曲霉毒素的检测外，还在脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)、 赤霉烯酮(zearalenone,.ZEN)等其他真菌毒素及河豚毒素、蓖麻毒素和苦马豆素等动物和植物源毒素检测 方面得到了广泛的应用，并均取得了较理想的效果，表明该法在食品毒素检测方面大有潜力可挖，值得进 一步应用。7 延伸阅读 7-3 ELISA 检测 一、ELISA 检测原理与分类 ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）检测原理是预先结合在固相载体上的抗 体或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免疫学反应，免疫复合物所携带的酶分子可将 特定的底物分子转化为具有特定颜色的化合物，并由颜色的深浅反映样品中抗原或抗体分子的量。ELISA 检测具有灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操作等特点，它是 20 世纪 70 年代初由 E. Engvall 及 B.K.VanWeemen 等在放射免疫分析的基础上建立起来的一种非均相的酶免疫检测技术。 根据检测目标的不同可以细分为检测抗体的间接法（图 7-3S1）和检测抗原的双抗原夹心法（图 7-3S2）。 （一）检测抗体的间接法 该方法的主要操作步骤为：①固相抗原的形成将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原，洗涤除去未 结合的抗原及杂质。②固相抗原抗体复合物的形成加入待检样品，保温反应，样品中的特异抗体与固相抗 原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。③加酶标抗抗体固相免疫 复合物中的抗体与酶标抗抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体 的量正相关。④加底物显色加入相应的底物进行显色，通过颜色定量分析。 （二）检测抗原的双抗原夹心法 该方法的主要操作步骤为：①固相抗体的形成将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未 结合的抗体及杂质。②固相抗原抗体复合物的形成加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合， 形成固相抗原抗体复合物，洗涤除去其他未结合物质。③加酶标抗体固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体 结合，进行保温反应。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相 关。④加底物显色固相上的酶催化底物成为有色产物，通过比色，测知标本中抗原的量。 二、ELISA 检测技术的应用与发展 （一）致病微生物检测 ELISA 法可用于检测食品中单核细胞增生李斯特菌、弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌、军团菌、假单胞菌 属、大肠杆菌 O157:H7、致贺氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌和腊样芽抱杆菌等多种致病微生物，在病原 微生物检测方面具有很大的发展空间。 （二）毒素检测 ELISA 技术除了应用于食品中黄曲霉毒素的检测外，还在脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol, DON）、 赤霉烯酮（zearalenone, ZEN）等其他真菌毒素及河豚毒素、蓖麻毒素和苦马豆素等动物和植物源毒素检测 方面得到了广泛的应用，并均取得了较理想的效果，表明该法在食品毒素检测方面大有潜力可挖，值得进 一步应用