@泰山医学院 省级精品课程申报 实验十一荧光分光光度法测定VB,含量 一、实验目的 掌握930A型荧光光度计测定VB2的原理，学会930A型荧光光度计使用方法，熟悉荧光光度 法的基本理论 二、实验原理 维生素B2(又称核黄素)的结构式如下 H,CN人NH e。yN大o HO：∠OH òH 由于其母核上N,和N间具有共轭双健，增加了整个分子的共轭程度，是一种具有强烈荧光 特性的化合物。其水溶波在pH6一7时荧光最强，其最大激发波长为入ex=465m,最大发射波 长为入cm=520nm。在其他条件恒定时，低浓度的维生素B2的荧光强度与其浓度成正比。即： F=K·C#?。当pH1时荧光强度消失，维生素2在碱性溶液中经光线照射，会发生分解 而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。另外保证VB2溶液的稳定性是获得好的 线性测量关系至关重要的条件，外界因素对其稳定性影响特别明显，溶液中溶解氧、强光照射、 温度、共存物等都会使其荧光強度消失。 荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法高，高浓度的溶液其荧北会有“自熄灭”作用， 以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使荧光强度下降，导致荧光强度与浓度不成正比，故 荧光分析法应在低浓度溶液中进行。荧光分析测定最佳浓度范围为10100μgml。当浓度较 大时，A>0.05时，荧光强度同浓度的线性关系将向浓度轴偏离。 本实验采用校准曲线法可测定维生素B2片剂中维生素B2的含量 三、主要试剂和仪器 1、VB2标准对照品（标准物质）：2、二次重蒸馏水：3、930A型荧光光度计：4、VB2的片 剂：5、石英比色皿：6、1%醋酸溶液：7、工作站：8、擦镜纸：9、100ml小烧杯：10、微孔 滤膜：11、25ml容量瓶7个（棕色容量瓶最好）：12、2ml吸量管（刻度吸管）：13、电子天平 四、实验步骤 1、930CRT型荧光光度计基本操作技术 (1)连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能。(2)接通仪器的电源开关(1