IBA=0.8*1/0.2=4ml 蔗糖=800*2.5%=20g 琼脂粉=800*0.7%=5.6g Ms绿色书23页表 (二)、如何减轻试管苗玻璃化现象？如何防止外植体的真菌污染？ 1.(第四章21页)(1)利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高 培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。 (2)适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元 素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。 (3)增加自然光照。因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。 (4)改善培养器皿的气体交换状态封口膜 (5)在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。 2.（第三章11页) 在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种 前，应开机15mn以达到空气的充分过滤灭菌。而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻 及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等。 (三)、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？ 选材：较幼嫩的材料，器官的生理状态和发肓年龄，外植体的大小为0.5一1.0cm(第三章3页) 消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗23次+2%`10%NaC10(0.1%HgC12)12min+无菌水冲洗3 次。（第三章5页) 接种：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子 ②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外 植体送入瓶中。（第四章4页） 六、论述题 为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无 特定病毒的植株？ 1)·感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感 染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少。 )·1.了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置2.母体植株的选择和预处理3.茎尖的剥离4.脱毒效果检 测 3)·取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1molL磷酸缓冲液(pH7.0),磨成匀奖，将其涂 抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。5分钟 后用清水清洗叶面。将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。 请阐述马铃薯脱毒和快繁的程序。为什么试管苗在经过热处理和茎尖培养等方法脱毒后，还需要进行病毒的鉴定？ 选择优良母株幼苗，茎尖的2~3cm小段，冲洗1h左右 表面消毒，（表面消毒剂、无菌水），在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，注射器针头或解剖针，切取 带有1~2个叶原基的生长点，接种于培养基中培养。 病毒在植物体内分布是不均一的，热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖缓慢（停 止)，而失去侵染能力，所以还需要病毒鉴定。IBA=0.8*1/0.2=4ml 蔗糖=800*2.5%=20g 琼脂粉=800*0.7%=5.6g Ms绿色书23页表 （二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？如何防止外植体的真菌污染？ 1. （第四章21页）（1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高 培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。 （2）适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元 素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。 （3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。 （4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜 （5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。 2.（第三章11页） 在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种 前，应开机15min以达到空气的充分过滤灭菌。而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻 及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等。 （三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？ 选材：较幼嫩的材料，器官的生理状态和发肓年龄，外植体的大小为0.5－1.0cm(第三章3页) 消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3 次。（第三章5页） 接种：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子 ②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外 植体送入瓶中。（第四章4页） 六、论述题 为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无 特定病毒的植株？ 1）．感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感 染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少。  2）．1.了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置2.母体植株的选择和预处理3.茎尖的剥离4.脱毒效果检 测      3）．取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），磨成匀奖，将其涂 抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。5分钟 后用清水清洗叶面。将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。 请阐述马铃薯脱毒和快繁的程序。为什么试管苗在经过热处理和茎尖培养等方法脱毒后，还需要进行病毒的鉴定? 选择优良母株幼苗，茎尖的２～３cm小段，冲洗1h左右 表面消毒，（表面消毒剂、无菌水），在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，注射器针头或解剖针，切取 带有1～2个叶原基的生长点，接种于培养基中培养。 病毒在植物体内分布是不均一的，热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖缓慢（停 止），而失去侵染能力，所以还需要病毒鉴定