P. fluorescens BIT-18为本实验室保藏、,E. coli Top10、E. coli BL21(DE3)和pMD19-T购 于 Novagen公司pET28a(+)购于 TaKaRa公司 12试剂 PCR相关试剂如r-7 aq dna聚合酶等购自大连宝生物工程有限公司;PCR产物纯化、酶 切产物纯化和质粒提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司:T4连接酶及限制性内切 酶包括 ECOR I、 Hind ll等购自 TaKaRa公司 2结果与讨论 21 P -PLB基因保守片段的克隆 以菌株P∫ crescens Bll-18总DNA为模板,采用引物Pl-F和Pl-R进行PPLB基因保守序 列PCR扩增,结果如图1所示从图中可以看出大小为500bp左右只在Lane2(P1-F和P-R双引 物扩增)中出现而在单引物扩增的Lane1、3不存在,说明该条带为双引物扩增所产生 M123 2000 250 图1 PE-PLB基因保守片段单引物PCR电泳图 (注: Lane m;DL2000 Marker; Lane 1;单引物P1-FPCR产物;Lane2:双引物P1-F和Pl-R PCR产物;Lane3:单引物P1RPCR产物) 图2PPLB的 Modeller棋拟 a.侧视图;b.仰视图 22化合物的结构描述2 P. fluorescens BIT-18为本实验室保藏,E. coli Top 10、E. coli BL21 (DE3) 和 pMD19-T购 于Novagen公司.pET-28a(+)购于TaKaRa公司. 1.2 试剂 PCR相关试剂如r-Taq DNA聚合酶等购自大连宝生物工程有限公司；PCR产物纯化、酶 切产物纯化和质粒提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司；T4连接酶及限制性内切 酶,包括EcoR I、Hind III等购自TaKaRa公司. 2 结果与讨论 2.1 Pf-PLB基因保守片段的克隆 以菌株P. fluorescens BIT-18总DNA为模板,采用引物P1-F和P1-R,进行Pf-PLB基因保守序 列PCR扩增,结果如图1所示.从图中可以看出大小为500 bp左右只在Lane 2（P1-F和P1-R双引 物扩增）中出现,而在单引物扩增的Lane 1、3不存在,说明该条带为双引物扩增所产生. M 1 2 3 图 1 Pf-PLB 基因保守片段单引物 PCR 电泳图 （注：Lane M：DL2000 Marker；Lane 1：单引物 P1-F PCR 产物；Lane 2：双引物 P1-F 和 P1-R PCR 产物；Lane 3：单引物 P1-R PCR 产物） 图 2 Pf-PLB 的 Modeller 模拟 a. 侧视图；b. 仰视图 2.2 化合物的结构描述 2000 1000 750 250 100 500 a b