实验二:微生物细胞大小与数量的测定 实验目的与要求: (1)了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。 (2)学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术,包括目镜测微尺、物镜测微尺的 校正技术与测定细胞大小的技术 (3)了解血球计数板的结构,学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术,包括样品 的点样、菌数计数的方法与计算。 、实验原理 1.微生物大小测定原理 微生物细胞的大小,是微生物重要的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很 小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺 目镜测微尺(图20-1)是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10mm长度 刻成100等分。测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量 经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际 表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正 以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度 镜台测微尺(图20-2)是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将1mm等分为100格,每 格长10μm(即0.01m),是专门用来校正目镜测微尺的。校正时,将镜台测微尺放在载物台上, 图20-1目镜测微尺 由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置,都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即 镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真 实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺 每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大 倍数下测量微生物大小。 2.血球计数板测定微生物数量的原理 镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较 大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板:一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽( Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,可以使用油镜 观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,故细菌不易看清 血球计数板是一块特制的厚载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较 宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个方格网(图Ⅳ-2)。每个方格网 共分9大格,其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种实验二：微生物细胞大小与数量的测定 一、实验目的与要求： （1） 了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。 （2） 学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、物镜测微尺的 校正技术与测定细胞大小的技术。 （3） 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品 的点样、菌数计数的方法与计算。 二、实验原理 1. 微生物大小测定原理 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很 小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺（图 20-1）是一块圆形玻片，在玻片中央把 5mm 长度刻成 50 等分，或把 10 mm 长度 刻成 100 等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量 经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际 表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正， 以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺（图 20-2）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将 lmm 等分为 100 格，每 格长 l0μm（即 0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上， 图 20-1 目镜测微尺 由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即 镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真 实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺 每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大 倍数下测量微生物大小。 2. 血球计数板测定微生物数量的原理 镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较 大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜 观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有 4 条槽而构成 3 个平台。中间的平台较 宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图Ⅳ-2)。每个方格网 共分 9 大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：