完整,并存在于后代而不被分解掉。 二、复制起点、单位和方向 DNA的复制是在起始阶段进行控制的,一旦复制起始,它就会继续下去直到整个复制子完成复制 1、复制起点 复制起点是以一条链为模板起始DNA合成的段序列。有时,两条链的复制起点并不总是在同一点上 如D环复制)。 在一个完整的细胞周期中,每一个复制起点只使用一次,完成一次复制过程 多数生物的复制起点,都是DNA呼吸作用强烈(甲醛变性实验)的区段,即经常开放的区段,富含AT ★环状DNA复制起点的确定方法 P325图196 ★复制起点的克隆和功能分析—一重组质粒转化法 大肠杆菌的复制起点onC区IKb的重组质粒在转化子中的复制行为与其染色体一样,受到严密控制,每 个细胞只有1-个拷贝,用核酸外切酶缩短onC克隆片段的大小,最后得到245bp的基本功能区,携带它的 质粒依然能够自我复制,拷贝数可以增加到20以上,这说明发动复制的序列在245bp的基本功能区,而决定 拷贝数的序列在基本功能区之外和1Kb之间 鼠伤寒沙门氏菌的起点位于一段2096bp的DNA片段上,与大肠杆菌的复制起始区有86%同源性,而且 有些亲缘关系较远的细菌,其复制起点在大肠杆菌中亦能起作用。因此,复制起始区的结构可能是很保守的。 起始序列含有一系列对称的反向重复和某些短的成簇的保守序列。 2、复制单位 复制子( Replicon ) Genome能独立进行复制的单位,每个复制子都含有一个复!起点 原核生物的染色体和质粒、真核生物的细胞器DNA都是环状双链分子,它们都是单复制子,都在一个 固定的起点开始复制,复制方向大多数是双向的,少数是单向复制。多数是对称复制,少数是不对称复制( 条链复制后才进行另一条链的复制) 环状DNA的复制眼象θ,称θ形复制。 真核生物的染色体DNA是线形双链分子,含有许多复制起点,因此是多复制子,每个复制子约有 100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有100个复制子。 病毒DNA多种多样,环状或线形,双链或单链,但都是单复制子。 3、复制方向 定点起始,复制方向大多数是双向的(等速进行或异速进行),形成两个复制叉,少数是单向复制,形成 个复制叉。 ★用放射自验判断DNA的复制方向及速度２ 完整，并存在于后代而不被分解掉。 二、 复制起点、单位和方向 DNA 的复制是在起始阶段进行控制的，一旦复制起始，它就会继续下去直到整个复制子完成复制。 1、 复制起点 复制起点是以一条链为模板起始 DNA 合成的一段序列。有时，两条链的复制起点并不总是在同一点上 （如 D 环复制）。 在一个完整的细胞周期中，每一个复制起点只使用一次，完成一次复制过程。 多数生物的复制起点，都是 DNA 呼吸作用强烈（甲醛变性实验）的区段，即经常开放的区段，富含 A.T。 ★环状 DNA复制起点的确定方法 P325 图 19-6 ★复制起点的克隆和功能分析——重组质粒转化法 大肠杆菌的复制起点 oriC 区 1Kb的重组质粒在转化子中的复制行为与其染色体一样，受到严密控制，每 个细胞只有 1-2 个拷贝，用核酸外切酶缩短 oriC 克隆片段的大小，最后得到 245bp 的基本功能区，携带它的 质粒依然能够自我复制，拷贝数可以增加到 20 以上，这说明发动复制的序列在 245bp 的基本功能区，而决定 拷贝数的序列在基本功能区之外和1Kb 之间。 鼠伤寒沙门氏菌的起点位于一段 296bp 的 DNA片段上，与大肠杆菌的复制起始区有 86%同源性，而且 有些亲缘关系较远的细菌，其复制起点在大肠杆菌中亦能起作用。因此，复制起始区的结构可能是很保守的。 起始序列含有一系列对称的反向重复和某些短的成簇的保守序列。 2、 复制单位 复制子(Replicon)：Genome 能独立进行复制的单位，每个复制子都含有一个复制起点。 原核生物的染色体和质粒、真核生物的细胞器 DNA 都是环状双链分子，它们都是单复制子，都在一个 固定的起点开始复制，复制方向大多数是双向的，少数是单向复制。多数是对称复制，少数是不对称复制（一 条链复制后才进行另一条链的复制）。 环状 DNA 的复制眼象θ，称θ形复制。 真核生物的染色体 DNA 是线形双链分子，含有许多复制起点，因此是多复制子，每个复制子约有 100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有1000 个复制子。 病毒 DNA 多种多样，环状或线形，双链或单链，但都是单复制子。 3、 复制方向 定点起始，复制方向大多数是双向的（等速进行或异速进行），形成两个复制叉，少数是单向复制，形成 一个复制叉。 ★用放射自显影实验判断DNA 的复制方向及速度