安全检测：将所制各的灭活菌液稀释成疫苗接种所用的浓度（一般为108cm),用注射 法将稀释后的灭活菌液接种到无志病史的同种寄主动物（水产养殖动物）体内，经20观 察无发病或死亡才说明该灭活细菌是安全的。 4·效果检测 抗体效价检测：用注射法将稀释后的灭活菌液接种到无患病史的同种寄主动物（水产养殖 动物)体内，连续养殖2个月，从第10开始每隔10取3尾以上接种生物用微量血 凝板法检测其平均凝集抗体效价。抗体效价检测方法为：抽取感染动物血液并离心分离血 清，用取样器吸取0.1ml血清加入经灭菌的96孔板的A1孔内，在96孔板A行的其他 孔内加入0.05ml无菌PBS,从A1孔内取0.05ml血清加入A2孔内，混匀后再从A2孔 内取0.05驷l液体加入A3孔内.，如此重复，使96孔板内后1个孔内的血清浓度 均比前1个孔低1倍（倍释法），再在96孔板的每个孔内加入0.05ml菌液（活的或灭 活的均可)，37℃孵育过夜后观察（最好在96孔板下垫一张黑纸以增加反差），出现 沉淀的最高血清稀释倍数即为血清中所含抗病原菌抗体的效价，比较不同时期内抗体效价的 变化情况，确定最高抗体效价值。一般情况下，抗体效价越高，灭活细菌作为疫苗的效果就 最好。 攻毒感染实验：选择无患病史的同种同龄寄主动物（水产养殖动物）作为感染对象，用注 射法进行攻毒感染。用注射法将稀释后的灭活菌液接种到无患病史的同种寄主动物（水产 养殖动物)体内，连续养殖2个月，从第20d开始每隔20d取10尾以上接种生物用活 的病原菌进行感染，感染方法为：。 (二)致病菌的人工感染 1)实验材料：嗜水气单胞南斜面（每组2支），试管架(1个)酒精棉球(1瓶)，无 菌生理盐水，灭菌空试管，麦氏比浊管 2)实验方法：用装有针头的注射器（或无菌吸管），吸取无菌生理盐水，滴注到培养有嗜 水气单胞茵的斜面上，振荡使斜面上的菌落洗下（或用灭菌接种环轻轻刮下），倒入灭菌空 试管中，用无菌生理盐水稀释调节菌浓度，与麦氏比浊管进行比色，使菌浓度达到2.1×10 9个细菌/ml(21亿)，用灭菌注射器抽取菌悬液，待人工感染时用。注射部位在鱼的 安全检测：将所制备的灭活菌液稀释成疫苗接种所用的浓度（一般为 10 8 cfu ），用注射 法将稀释后的灭活菌液接种到无患病史的同种寄主动物（水产养殖动物）体内，经 20d 观 察无发病或死亡才说明该灭活细菌是安全的。 4 ．效果检测 抗体效价检测：用注射法将稀释后的灭活菌液接种到 无患病史的同种寄主动物（水产养殖 动物）体内，连续养殖 2 个月，从第 10d 开始每隔 10d 取 3 尾以上接种生物用 微量血 凝板法检测其平均凝集抗体效价 。抗体效价检测方法为：抽取感染动物血液并离心分离血 清，用取样器吸取 0.1ml 血清加入经灭菌的 96 孔板的 A1 孔内，在 96 孔板 A 行的其他 孔内加入 0.05ml 无菌 PBS ，从 A1 孔内取 0.05ml 血清加入 A2 孔内，混匀后再从 A2 孔 内取 0.05ml 液体加入 A3 孔内 . ，如此重复，使 96 孔板内后 1 个孔内的血清浓度 均比前 1 个孔低 1 倍（倍释法），再在 96 孔板的每个孔内加入 0.05ml 菌液（活的或灭 活的均可）， 37 ℃ 孵育过夜后观察（最好在 96 孔板下垫一张黑纸以增加反差），出现 沉淀的最高血清稀释倍数即为血清中所含抗病原菌抗体的效价。比较不同时期内抗体效价的 变化情况，确定最高抗体效价值。一般情况下，抗体效价越高，灭活细菌作为疫苗的效果就 最好。 攻毒感染实验：选择 无患病史的同种同龄寄主动物（水产养殖动物）作为感染对象，用注 射法进行攻毒感染。 用注射法将稀释后的灭活菌液接种到 无患病史的同种寄主动物（水产 养殖动物）体内，连续养殖 2 个月，从第 20d 开始每隔 20d 取 10 尾以上接种生物用 活 的病原菌进行感染，感染方法为： 。 （二）致病菌的人工感染 1) 实验材料：嗜水气单胞菌斜面（每组 2 支），试管架（ 1 个）酒精棉球（ 1 瓶），无 菌生理盐水，灭菌空试管，麦氏比浊管。 2 ）实验方法：用装有针头的注射器（或无菌吸管），吸取无菌生理盐水，滴注到培养有嗜 水气单胞菌的斜面上，振荡使斜面上的菌落洗下（或用灭菌接种环轻轻刮下），倒入灭菌空 试管中，用无菌生理盐水稀释调节菌浓度，与麦氏比浊管进行比色，使菌浓度达到 2.1×10 9 个细菌 /ml （ 21 亿），用灭菌注射器抽取菌悬液，待人工感染时用。注射部位在鱼的