6.2.1.1常用光镜标本制备技术 切片标本的制备。这是最常用的方法。应用光学显微镜观察机体各部的微细结构时, 首先应把所有要观察的材料制成薄片,最基本的就是切片方法,其中石蜡切片更为常用。其 制备程序大致如下 1.取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材料切成适当的小块,立即浸入固定 液(如甲醛溶液等)中进行固定,防止离体后结构发生变化,使其尽可能保持活体时的结构 状态。 2.脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内,把固定好的材料用乙醇等脱水,经二甲苯 透明后,再浸入加温溶化的石蜡中浸透包埋使组织块变硬 3.切片与染色。将包埋的组织蜡块,用切片机切成5-10μm左右的薄片,贴在载玻片 上,脱蜡后进行染色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色,简称HE染色 4.封固。在切片上滴加中性树胶,用盖玻片进行封固,保存备用。 在制作较硬组织(如骨组织等)或较大组织器官(如眼球)等切片,可用火棉胶代替 石蜡进行浸透包埋,再进行染色。为了较好地保存细胞内酶的活性,可选用冰冻切片,将 组织在低温条件下快速冻结,直接切片,进行染色。 6.2.1.2涂片、铺片、磨片标本的制备 血液等液体材料,可直接在玻片上涂片,干燥后再进行固定和染色。疏松结缔组织和 肠系膜等薄层组织,可在玻片撕开展平,制成铺片,待干燥后进行固定和染色。骨和牙等坚 硬组织除用酸(稀硝酸等)脱钙后再按常规制成切片外,还可直接硏磨成薄的磨片进行染色 观察 6.2.1.3组织化学和免疫组织化学方法 组织化学与细胞化学是应用物理、化学和免疫学方法,对组织、细胞内某些化学成分 的定性、定位和定量进行研究,从而探讨与其相关的机能活动 1.组织化学。其原理是在组织切片上或被取材料上,加某种试剂,使它与组织或细胞 内某些物质起化学反应,形成最终反应产物。光镜组织化学要求其最终产物是有色的沉着 物:电镜细胞化学要求其最终产物是重金属沉着物。观察其沉着物的颜色、深浅或电子密 度,可对某种物质进行定性、定位和定量。 2.免疫细胞化学。是将免疫学基本理论与细胞化学技术相结合而建立起来的新技术 主要是应用抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某些肽类和蛋白质等大分子物质的分 布。肽类和蛋白质种类繁多,均具抗原性。提取动物的某些肽类和蛋白质,作为抗原注入另 种动物体内,则产生与抗原相应的特异性抗体(免疫球蛋白),从血清中制备该抗体。如 使抗体与荧光素结合,则形成荧光标记抗体。常用的荧光素为异硫氰酸荧光素(FITC) 当用该荧光素标记抗体处理组织切片时,则与组织内相应抗原发生特异结合,在荧光显微镜 下呈黄绿色荧光部分,即为抗原抗体复合物,称此为荧光标记抗体法。如抗体与辣根过氧化 物酶(HRP)等酶标记,与抗原结合后呈棕红色,可在光镜或电镜下观察,此即酶标抗体 6.2.1.4组织培养 组织培养或细胞培养是在体外研究活组织或活细胞的形态结构和生理功能动态变化的 种很有价值的研究手段,已广泛应用于生物医学的各个领域。组织培养是在无菌条件下进 行,从机体取得的活组织或活细胞,或者长期传代培养的细胞株,放入盛有营养液的培养基 (天然的或人工合成的)的培养瓶(板)内保持一定温度、适宜的O2与CO2浓度、pH值等 条件进行培养。可在倒置显微镜下直接观察细胞的增殖、分化、运动、吞噬等动态变化,并 可用显微录像或显微电影真实地记录下活细胞的连续变化过程 6.2.1.5放射自显影 放射自显影是研究追踪某些物质在体内或细胞内的代谢径路与结构的关系。 将放射性同位素或同位素标记的物质注入体内或组织培养的营养液内,间隔一定时间 取出被检材料,制成标本切片或整体切片,并在其上涂以感光材料,置暗处曝光,继数日或 数周后,再经显影、定影处理,在放射性同位素或标记物存在的部位,溴化银被还原成微 细的银粒。这样可在光镜或电镜下观察结构的同时,观察放射性同位素或其标记物的分布 数量、排泄等代谢过程,借此可判明该物质的动态变化过程及其与功能的关系6．2．1．1 常用光镜标本制备技术 切片标本的制备。这是最常用的方法。应用光学显微镜观察机体各部的微细结构时， 首先应把所有要观察的材料制成薄片，最基本的就是切片方法，其中石蜡切片更为常用。其 制备程序大致如下： 1．取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材料切成适当的小块，立即浸入固定 液（如甲醛溶液等）中进行固定，防止离体后结构发生变化，使其尽可能保持活体时的结构 状态。 2．脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内，把固定好的材料用乙醇等脱水，经二甲苯 透明后，再浸入加温溶化的石蜡中浸透包埋使组织块变硬。 3．切片与染色。将包埋的组织蜡块，用切片机切成 5-10μm 左右的薄片，贴在载玻片 上，脱蜡后进行染色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色，简称 HE 染色。 4．封固。在切片上滴加中性树胶，用盖玻片进行封固，保存备用。 在制作较硬组织（如骨组织等）或较大组织器官（如眼球）等切片，可用火棉胶代替 石蜡进行浸透包埋，再进行染色。为了较好地保存细胞内酶的活性 ，可选用冰冻切片，将 组织在低温条件下快速冻结，直接切片，进行染色。 6．2．1．2 涂片、铺片、磨片标本的制备 血液等液体材料，可直接在玻片上涂片，干燥后再进行固定和染色。疏松结缔组织和 肠系膜等薄层组织，可在玻片撕开展平，制成铺片，待干燥后进行固定和染色。骨和牙等坚 硬组织除用酸（稀硝酸等）脱钙后再按常规制成切片外，还可直接研磨成薄的磨片进行染色 观察。 6．2．1．3 组织化学和免疫组织化学方法 组织化学与细胞化学是应用物理、化学和免疫学方法，对组织、细胞内某些化学成分 的定性、定位和定量进行研究，从而探讨与其相关的机能活动。 1．组织化学。其原理是在组织切片上或被取材料上，加某种试剂，使它与组织或细胞 内某些物质起化学反应，形成最终反应产物。光镜组织化学要求其最终产物是有色的沉着 物；电镜细胞化学要求其最终产物是重金属沉着物。观察其沉着物的颜色、深浅或电子密 度，可对某种物质进行定性、定位和定量。 2．免疫细胞化学。是将免疫学基本理论与细胞化学技术相结合而建立起来的新技术。 主要是应用抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞内某些肽类和蛋白质等大分子物质的分 布。肽类和蛋白质种类繁多，均具抗原性。提取动物的某些肽类和蛋白质，作为抗原注入另 一种动物体内，则产生与抗原相应的特异性抗体（免疫球蛋白），从血清中制备该抗体。如 使抗体与荧光素结合，则形成荧光标记抗体。常用的荧光素为异硫氰酸荧光素（FITC）， 当用该荧光素标记抗体处理组织切片时，则与组织内相应抗原发生特异结合，在荧光显微镜 下呈黄绿色荧光部分，即为抗原抗体复合物，称此为荧光标记抗体法。如抗体与辣根过氧化 物酶（HRP）等酶标记，与抗原结合后呈棕红色，可在光镜或电镜下观察，此即酶标抗体 法。 6．2．1．4 组织培养 组织培养或细胞培养是在体外研究活组织或活细胞的形态结构和生理功能动态变化的 一种很有价值的研究手段，已广泛应用于生物医学的各个领域。组织培养是在无菌条件下进 行，从机体取得的活组织或活细胞，或者长期传代培养的细胞株，放入盛有营养液的培养基 （天然的或人工合成的）的培养瓶（板）内保持一定温度、适宜的 O2 与 CO2 浓度、pH 值等 条件进行培养。可在倒置显微镜下直接观察细胞的增殖、分化、运动、吞噬等动态变化，并 可用显微录像或显微电影真实地记录下活细胞的连续变化过程。 6．2．1．5 放射自显影 放射自显影是研究追踪某些物质在体内或细胞内的代谢径路与结构的关系。 将放射性同位素或同位素标记的物质注入体内或组织培养的营养液内，间隔一定时间 取出被检材料，制成标本切片或整体切片，并在其上涂以感光材料，置暗处曝光，继数日或 数周后，再经显影、定影处理，在放射性同位素或标记物存在的部位，溴 化银被还原成微 细的银粒。这样可在光镜或电镜下观察结构的同时，观察放射性同位素或其标记物的分布、 数量、排泄等代谢过程，借此可判明该物质的动态变化过程及其与功能的关系